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精选优质文档-倾情为你奉上人肿瘤坏死因子的生产血清中可产生一种与内毒素无关的活性因子，可以引起肿瘤出血坏死，称为肿瘤坏死因子。肿瘤坏死因子根据来源可以分为三种：由活化单核细胞产生的称为TNF-；由活化T淋巴细胞产生的称为TNF；由NK细胞产生的NK细胞毒性因子称为TNF。其中TNF-是仅对癌细胞有杀伤作用而对正常细胞无明显细胞毒作的非种属特异性活性刚子，有着广阔的临床应用前景。TNF-是由巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白。是一类能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子。一、目的基因的获取用PCR方法从含人肿瘤坏死因子基因的质粒中扩增出hTNF的cDNA序列或者通过相应数据库查询（Genbank）人坏死因子的序列直接利用PCR扩增技术合成。二、基因载体表达的构建用限制性内切酶切消化PCR产物后插入到经过相同内切酶酶切的大肠杆菌表达载体pTrcHis2A质粒，构建成重组表达质粒。利用分子杂交技术，以电泳的方式鉴定重组质粒，根据与maker条带的对比，选出符合要求的重组质粒。三、将重组质粒导入受体细胞用CaCl2等处理大肠杆菌，使其细胞膜的通透
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