1、深圳纽斯康生物工程有限公司检定菌管理规程颁发部门质量部 新订 修订 复审 页码 第 1 页 共 2 页文件性质技术文件 管理文件 操作文件 文件编码 ZL-SMP-058-01起草 年 月 日审查 年 月 日批准 年 月 日执行日期 年 月 日依据 保健食品良好生产规范GB17405-1998分发部门质量部一、目 的：规定了微生物限度度用检定菌管理工作的基本要求。二、适用范围：适用于微生物限度用检定菌。三、职 责 者：由微生物限度操作 QC 严格执行。四、内 容：1 检定菌的购买 1.1 根据检验品种的需要，由微生物限度检查员填写购买申请。内容包括：菌种名称、购买数量、用途等。报 QC 室主任
2、审核批准。1.2 购买地点：当地药检所。2 检定菌保藏2.1 保藏方法:定期移植保藏法：将菌种每隔 1-3 个月（大肠埃希菌为 1 个月）接种在三支新鲜的琼脂斜面上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，选出两支生长旺盛的，存放在 2-8左右的冰箱中保藏，一支用于传代；另一支用于阳性对照。2.2 保藏注意事项2.2.1 保藏的菌种均应是生命力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。传至第五代，申请购置新菌种。第五代使用 3 个月后，灭活销毁。2.2.2 每天检查一次保存菌种的冰箱温度，菌种管的棉塞是否松动或生霉。如有异常及时处理，并记录。2.2.3 移植时须核对传代次数、传代日期、所用培养基
3、并记录。2.2.4 每次移植培养后，要与原种名称逐一核对，确证培养特征和纯度无误后再继续保藏。3 检定菌定期检查3.1 每月检查保藏菌种管的外观及干燥状态，并将菌种培养复活，检查保藏菌种的存活率和形态，同时进行菌种检定。检定的项目一般包括菌落性状、革兰染色、显微镜下菌体形态等，并与保藏菌种的原始鉴定项目进行对照比较，并作好详细记录。3.2 经鉴定不合格的，应销毁灭活。4 检定菌的管理:检定菌由专人负责管理，并有管理记录。5 检定菌的销毁处理:检定菌必须经高压蒸汽 121灭菌 20 分钟灭活处理后方可清洗、排放或弃置，并填写文件名称 检定菌管理规程文件编码 ZL-SMP-058-01第 2 页共
4、 2 页灭菌记录。6 菌种的传代和使用：6.1 接 种 、 分 离 、 培 养 是 微 生 物 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 ， 要 求 在 无 菌 操 作 和 或 无 菌 环 境 下 进 行 。6.2 接 种 将 微 生 物 的 培 养 物 、 含 有 微 生 物 或 可 以 污 染 有 微 生 物 的 样 品 接 种 到 培 养 基 上 的 一 种 操 作 技 术 。冻干菌种（0 代）适宜的增菌液约 1mL 溶解 增菌液培养复壮（1 代） 分装冷冻保存（1 2mL） 适宜的斜面培养基 增菌液培养 分装冷冻保存划线传代（2 代） 复壮（2 代） 增菌液培养 分装冷冻保存适宜的斜面培
5、养基 使用 增菌液培养 复壮（3 代） 划线传代（3 代） 复壮（3 代） 增菌液培养 适宜的斜面培养基 复壮（4 代）适宜的斜面培养基 划线传代（4 代） 划线传代（4 代） 使用 分离检查（定期） 适宜的斜面培养基 使用 划线传代（5 代）适宜的斜面培养基 划线传代（5 代） 使用 使用 如使用 10%的甘油，应取各代的斜面培养物 12 接种环，加入甘油中，冷冻保存。7. 菌液的制备和使用 斜面培养物 1 环适宜液体培养基 1015ml，培养 1824h 取适当量，用灭菌生理盐水稀释后比浊按说明和预实验将菌液稀释到相应倍数 1：10 7。稀释至对照菌的加入量为 50100 个按说明和预实验将菌液稀释到相应倍数计数、验证实验、阳性对照 8. 菌种的检查与复壮 适宜液体培养基 1015ml，培养 1824h 取适当量，用灭菌生理盐水稀释后比浊按说明和预实验将菌液稀释到相应倍数计数、验证实验、阳性对照
