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PCR 操作步骤主要内容v PCR 主要成分v PCR 操作步骤v PCR 注意事项v PCR 操作常见问题讨论PCR 主要成分v Bufferv Mg2+v dNTPsv Primerv Probev TaqDNA 聚合酶v 模板Bufferv PCR 的反应buffer 一般为10Xbufferv 主要作用是提供反应的缓冲体系，维持反应的稳定，给TaqDNA 聚合酶提供一个最适酶催反应条件。v 组成Tris-HCl （pH8.3 ）100mMKCl500mM 有利于引物与模板的退火v 终浓度为1XMg2+v MgCl2 （25mM ）v 作用TaqDNA 聚合酶活性所必需的，提供离子浓度v 通常Mg2+ 浓度范围为1-5mM 。Mg2+ 可促进Taq 酶活性影响反应产量，但浓度过高会增加非特异性扩增。对于一种未经实践的PCR 反应，可以用0.5mM的递增浓度的Mg2+ 进行预备实验，选出最适的Mg2+ 浓度。v 终浓度为2.5mMdNTPv 4 种脱氧三磷酸核苷酸（25mM ）dNTP 原液可稀释至25mM 并分装，-20 贮存。v 终浓度为0.3mMPrimerv PCR 反应产
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