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精选优质文档-倾情为你奉上由于Taq DNA聚合酶是目前PCR反应体系中应用最广泛的酶，因此此文主要讨论使用该酶的PCR反应体系。A 镁离子浓度镁离子是热稳定DNA聚合酶的辅因子，其浓度对PCR至关重要。模板DNA的浓度，鳌合物（如EDTA和柠檬酸盐）、dNTP浓度和蛋白都会影响反应体系中游离镁离子的量。如果游离的镁离子含量不够，那么Taq DNA聚合酶则无法行使功能(figure1)。过多的游离镁离子则会降低酶的保真度，可能会增加非特异性扩增。因此，研究者应当根据实际的实验结果来优化每一反应中镁离子的浓度。可以用一系列的镁离子浓度梯度来验证，镁离子浓度范围为14mM，每次增加或降低0.51 mM。扩增产量最高，非特异性产物最低时的镁离子浓度即为最优。最优镁离子的浓度范围跟DNA聚合酶的类型相关，例如，Pfu DNA 聚合酶似乎对镁离子的依赖性更低，但其优化范围通常为26mM。许多DNA聚合酶产品提供Mg-free reaction buffer和单独一管25mM MgCl2，这样就可以自行调节Mg2+浓度，优化反应体系。MgCl2溶液在反复冻融后会出现浓
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