1、薄层色谱法标准操作规程 依据：中华人民共和国药典2000 年版二部。内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。2 仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用 5cm20cm，10cm20cm 或 20cm20cm 的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶 G、硅胶 GF、硅胶 H、硅胶 HF254，其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝 G、微晶纤维素、微晶纤维素 F254 等。其颗粒大小，一般要求直径为 1040m
2、。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用 1015%煅石膏（CaSO42H2O 在 140烘 4 小时） ，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.50.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。3 操作方法：
3、3.1 薄层板制备：除另有规定外，将 1 份固定相和 3 份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为 0.20.3mm） ，取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在 110烘 30 分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视） 。3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为 24mm，点间距离约为 1.52.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室
4、中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中） ，密封室盖，等展开至规定距离（一般为 1015cm） ，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。4 注意事项：4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在 110活化 30 分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。4.3 点样点一般为圆点，不能太大
