1、 大鼠I 型胶原（COL-I）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T1g/L-32g/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中 I型胶原（COL-I ）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 I 型胶原（COL-I ）水平。用纯化的大鼠 I型胶原（COL-I）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被 单抗的微孔中依次加入 I 型胶原（COL-I），再与 HRP 标记的 I 型胶原（COL-I）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄
2、色。颜色的深浅和样品中的 I型胶原（COL-I ）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠 I 型胶原（COL-I）浓度。试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液 20ml1瓶6ml1瓶12孔8条6ml1瓶6ml1瓶6ml1/瓶789终止液 6ml1瓶0.5ml1瓶1.5ml1瓶1份2 酶标试剂 标准品（64g/L）标准品稀释液3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂 A液6 显色剂 B液10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反
3、复冻融2不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32g/L16g/L8g/L4g/L2g/L5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150l的原倍标 准品加入 150l标准品稀释液150l的 5号标 准品加入 150l标准品稀释液150l的 4号标 准品加入 150l标准品稀释液150l的 3号标 准品加入 150l标准品稀释液150l的 2号标 准品加入 150l标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准
4、孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样 品孔中先加样品稀释液 40l ，然后再加待测样品 10l （样 品最终稀释度为 5倍）。加样 将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37温育30分钟。4. 配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转 黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸 上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用 标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式， 计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
