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外 周血单个核细胞总 RNA的分离纯化及其逆转 录实验内容 人外周血单个核细胞总 RNA 的分离和纯化。 逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）。外周血单个核细胞分离的原理人外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cell， PBMC）包括 淋巴细胞 和 单核细胞 。 单核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，因此利用一种介于 1.075-1.090之间的聚蔗糖-泛影葡胺（ ficoll-hypaque ）分离液作密度梯度离心， 离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布， 从而分离出 PBMC。外周血单个核细胞的分离实验步骤1.吸取 2ml淋巴细胞分离液加入5ml塑料试管；2.取抗凝血 1ml，用 1ml生理盐水稀释 混匀 ，然后 沿管壁缓慢 加入到 淋巴分离液（上层为抗凝血，下层为淋巴细胞分离液）；3. 2500rpm，离心 15min(沉降系数不同，而分离出单核细胞 )；4. 吸弃 最上层血浆， 再吸取单核细胞层至一新的5ml塑料试管中 ，加生理盐水至管口 1cm处，混匀后离心， 2500rpm， 5min；5.吸弃 上清，加生理盐水 5
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