胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）注册.DOC

1、10胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）注册技术审查指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素 C 测定试剂（免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。本指导原则是对胱抑素 C 测定试剂（免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应 提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的

2、前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、 标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围胱抑素 C 测定试剂（免疫比浊法）是指基于颗粒增强透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素 C 进行体外定量分析的试剂(盒)。目前胱抑素 C 含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比1浊法和散射免疫比浊法。其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分

3、析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。依据体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第 5 号）和食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知（食药监械管2013242 号）, 胱抑素 C 测定 试剂（盒）（免疫比浊法）管理类别为类，分 类代号为 6840。二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究 结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第 5 号）和关于公布体

4、外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告（国家食品药品监督管理总局公告 2014 年第 44 号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容：1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应症背景情况 （1）胱抑素 C 的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。胱抑素 C(Cystatin C,CysC)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,也被称为 -微量蛋白及 -后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中,是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为 13.3KD,由 122 个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环血液中的 Cys C 能自由透过肾小球，

5、在近曲小管几乎全部被上皮细胞摄取并分解，尿中仅微量排出。Cys C 水平不受性 别、年龄、饮食等因素的影响，是一种反映肾小球12滤过率（GFR）变化的理想内源性 标志物。当肾功能受损时，Cys C 在血液中的浓度随 肾小球滤过率变化而变化。肾衰时, 肾小球滤过率下降，Cys C 在血液中 浓度可增加数倍甚至十数倍。（2）与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。肾小球滤过率（GFR）的 评估在肾功能的监测方面具有重要意义。注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。CysC分子量较小,其测定方法主要基于免疫反应原理。随着CysC

6、 在临床上的应用,检测它的方法也越来越多,按照原理大体上可分为二类:一类是非均相法:单向免疫扩散法(RID)、放射免疫 测定法(RIA)、荧光免疫测定法(FIA)、酶联免疫测定法 (ELISA)；一类是均相法 :颗粒计数免疫测定法,颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA),颗粒增强散射免疫比浊法(PENIT)。非均相法难于自动化，限制了CysC 的临床推广应 用，胶乳免疫测定是一种均相测定方法,在胶乳颗粒上包被抗体,与抗原结合时颗粒发生凝集,此方法易于自动化，已被广泛应用于临床。2.产品描述包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量控制及制备方法、主要生产工艺过程及关键控制点，质控品、校准品

7、的制备方法及溯源情况。3.有关生物安全性方面的说明如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运13输、使用过程中对使用者和环境的安全，研究者应提供上述原材料有关生物安全性的说明。4.有关产品主要研究结果的总结和评价5.参考文献6.其他包括同类产品在国内外批准上市的情况，相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。（二）主要原材料的研究资料（如需提供）主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；质控品（如产品包含）、校准品（如产品包含）的原料选择、制备、定值过程及试验资料；校准

8、品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）产品的主要生产工艺可以用流程图表示，明确关键工序和特殊工序，并简单说明控制方法。确定反应温度、时间、缓冲体系等的研究资料、确定样本和试剂（盒）组分加样量的研究资料。不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。（四）分析性能评估资料申请人应提交生产者在产品研制阶段对三批试剂（盒）进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、 实验数据、 统计方法、研究结论等详细资料。性能评 估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整

9、体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。性能评估应至少包括空白吸光度、分析灵敏度、空白限、精密度、准确度、线性、分析特异性（抗干扰能力）等。141. 试剂空白吸光度用生理盐水作为样本重复测定 2 次，记录试剂（盒）参数规定读数点主波长下的吸光度值（A），结果均值应符合 产品技术要求性能指标的要求。2.分析灵敏度测定已知浓度在（1.000.10 ）mg/L 的样本，记录试剂（盒）规定参数的吸光度差值。 换算为 1.00mg/L 的胱抑素 C 的吸光度差值，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。3.空白限用试剂（盒）对空白样本进行至少 20 次重复检测，计算 20 次测试结果的平均值( )和标

10、准差(SD)，以 +2SD 作为空白限的判定依据，结果xx应符合产品技术要求性能指标的要求。4.准确度建议按如下优先顺序，同时结合申请人实际情况，采用如下方法之一对试剂（盒）准确度进行评价。(1)相对 偏差根据生产企业提供的试剂（盒）线性区间，将可用于评价常规方法的有证参考物质作为样本，按照待测试剂（盒）说明书的步骤进行检测，每个样品重复测定3次，测试结果记为（Mi），按公式（1）分别计算相对偏差（Bi），如果3次结果都符合产品技术要求性能指标的要求，即判为合格。如果大于等于2次的结果不符合，即判为不合格。如果有2次结果符合，1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别按照公式（1）计算

11、相对偏差，如果大于等于19次测试的结果符合产品技术要求性能指标的要求，即判为15合格，准确度符合产品技术要求性能指标的要求。 Bi=(Mi-T)/T100% (1) 式中： Bi相对偏差； Mi测 量浓度； T有 证参考物质标示值。 （2（回收试验在人源样品中加入一定体积由具有溯源性的参考物质配制的标准溶液标 准溶液体 积与人源性样品体积比应不会 产生基质的变化，加入 标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）检测线性区间内 或纯品，每个 浓度重复检测3次，按公式（2）计算回收率，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。R=C(V0+V)C 0V0) / (VCS)100% （2）式中：R 回收率；V

12、 加入标准溶液的体积；V0 人源样品的体积；C 人源样品加入标准溶液后的检测浓度；C0 人源样品的检测浓度；Cs 标准溶液的浓度。（3）方法学比对参照 EP9-A2 的方法，用不少于 40 个在检测浓 度范围内不同浓度的16人源样品，以生产企业指定的已上市分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂（盒）操作方法及比对方法分别检测。用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）及每个浓度点的相对偏差，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。在实施方法学比对前，确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。5.精密度

13、测量精密度的评估方法包括重复性和批间差试验，应至少包括两个浓度水平的样本，其中一个样本浓度应在（1.000.10）mg/L 样本范围内，另一个样本应为异常高值样本。（1）重复性 在重复性条件下，对不同浓度的样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（ ）和标准差（SD），根据公式（3）得出变异系数（CV），结X果均应符合产品技术要求性能指标的要求。 CV=SD/ 100% (3) X式中： CV变异系数； SD10次测 量结果的标准差； 10次测量结果的平均值。 X（2）批间差 分别用三个不同批号试剂（盒），对不同浓度的样品，分别重复测定3次，计算每个 浓度样本每批号3次测量结果的平均

14、值（ i，i=1、2、3），根据X17公式（4）、公式（5）计算批间相对极差（R）， 结果均应符合产品技术要求相应性能指标的要求。 = (4)TX321R=( max- min)/XT100% (5) 式中： R批 间相对极差； max i的最大 值， i=1、2、3； Xmin i的最小值，i=1、2、3； T三批测量结果的总平均值。6.线性取接近测定范围上限的高值(H)和接近下限的低值(L)样本各一份，混合成至少 6 个稀释浓度的样本(x i)，充分混匀，防止蒸发或其他改变。用试剂（盒）分别测试各稀释浓度 3 次，然后分别计算每个稀释浓度检测结果的均值(y i)，以 xi为自变量，以 yi

15、为因变量求出线性回归方程，按公式（6）计算线性回归的相关系数(r)；同时将 xi 代入线性回归方程，计算 yi 的估计值(y ie)，根据公式（7）和（8）计算线性绝对偏差或相对偏差(R i),结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。（6）绝对偏差 = 检测结果均值（y i）- 估计值（y ie） （7） （8）10%-Rieiii 建立试剂线性所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。2i2i)(x-r187.分析特异性（1）交叉反应：易产生交叉反应的其他抗原、抗体及嗜异性抗体等的验证情况；（2）干扰物质：可采用回收试验对样本中常见干扰物质对检测结

16、果的影响，如溶血、高脂、黄疸、类风湿因子、抗凝 剂等干扰因子的研究， 干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度，结果应量化表示，禁用轻度、严重的模糊表述；（3）药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择何种药物及其浓度进行。8.其他需注意问题（1）如注册申请中包括不同适用机型，需要提交在不同机型上进行上述项目评估的试验资料及总结。如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能

17、差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。分析性能评估报告应明确所用仪器设备型号、校准品、质控品等的产品名称、生产企业名称、生产批号等信息。（2）校准品溯源及质控品定值校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料。应参照 GB/T 21415-2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性的要求，提供企业（工作）校准品及试剂（盒）配套校准品定值及不确定度计算记录。提供质控品在所有适用机型上进行的定值资料。19（五）参考区间确定资料应明确研究采用的样本来源、详细的试验资料、统计方法等，参考值范围可参考文献资料，但应当进行转移验证。验证样本数量应不

18、低于 120 例。建议参考 CLSI/NCCLS C28-A2。（六）稳定性研究资料稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者通常包括实时稳定性（有效期）、开瓶稳定性、复溶稳定性（如有）、运输稳定性等。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论，对于实时、运输及开瓶稳定性研究，应提供至少 3 批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的性能检测报告资料。试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。（七）生产及自检记录提供连续三批产品生产及自检记录的复印件。（八）临床评价资料临床研究资料应符合关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告（国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 16 号）要求，同时研究资料的形式应符合体外诊断试剂注册申报资料形式要求临床研究资料有关的规定。下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。1.研究方法选择境内已批准上市的性能相近的同类产品作为比对试剂，采用拟申报产品与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效或优于已上市产品。建 议企业尽量选择方法学相同、线性范围及精密度等性能接近的同类试剂作为比对试剂。