1、西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程第三章 基因克隆的酶学基础第一节 限制性内切酶第二节 DNA、 RNA连接酶第三节 DNA聚合酶第四节 其它酶第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程第一节 限制性内切酶 返回第三章3.1.1 寄主控制的限制与修饰现象（ 50年代初 ）E.coli KE.coli CEOP=1EOP=1EOP= 10-4 EOP=10-4 EOP=1EOP=1EPO: efficiency of plate限制的实质是切割外源 DNA, 修饰的实质是通过甲基化等修饰自身 DNA而不被切割起作用的是 核酸内切酶 和 甲基化酶第三章 基因工程酶学基础西北
2、师范大学 精品课程 武国凡基因工程v 型内切酶的发现3H标记 未修饰 的 噬菌体 DNA + 32P标记 修饰 的 噬菌体 DNA 不同菌株细胞温育一定时间蔗糖梯度离心分析 DNA未修饰的 DNA降解 修饰的 DNA未降解表明菌株细胞中存在核酸内切酶的活性3.1.2 限制酶的发现 返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程特性 型 型 型限制修 饰 活性 单 一功能 分开的内切和甲基活性双功能蛋白 质结 构 三种 亚 基 单 一成分 2种 亚 基辅 助因子 ATP， Mg+2、 SAM Mg+2 ATP， Mg+2 、 SAM识别 位点 EcoB:TGA(N)8T
3、GCT 旋 转对 称 EcoP1:AGACC序列特异的切割 距 识别 位点至少 1000 bp 随机切割识别 位点特异切割 识别 位点 3端 24-26 bp处基因克隆中的用 处 无用 十分有用 用 处 不大3.1.3 限制性内切酶的一般特点 返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程3.1.4 限制性内切酶的命名方式 第一个字母采用含有此酶的细菌属名的第一个字母， 后两个字母为种名的前两个字母，小写，株系数字通常都省略， 罗马数字用来表示从同一个细菌中分离出的不同的限制性内切酶。 比如 HpaI和 HpaII就是从同一种细菌中分离出来的第一种和第二种类型 II的
4、限制性内切酶。返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程被 酶 切开的双链 DNA在端口各形成 4个碱基暴露在外的单链，即形成粘性末端， 内切部位为磷酸二酯键处返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程5 GTTAAC 3 3 CAATTG 55 GTT AAC 3 3 CAA TTG 5返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程3.1.5 同尾酶和同裂酶AGATCT A GATCTTCTAGA TCTAG ACGATCG C GATCGGCTAGC GCTAG C返回第三章第三章 基因工程酶学基础西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程
