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精选优质文档-倾情为你奉上植物组织中可溶性蛋白质含量的测定-考马斯亮蓝 G 250 染色法一、原理 考马斯亮蓝 G 250 ( Coomassie brilliant blue , G-250 )法是利用蛋白质 染料结合的原理,定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝 G-250 存在着两种不同的颜色形式,红色和蓝色。它和蛋白质通过范德瓦尔键结合,在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质和染料结合符合比尔定律。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式,最大光吸收由 465 nm 变成 595 nm ,通过测定 595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和染料结合是一个很快的过程,约 2 min 即可反应完全,呈现最大光吸收,并可稳定 1 h ,之后,蛋白质染料复合物发生聚合并沉淀出来。此法灵敏度高,易于操作,干扰物质少,是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低,且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料 植物材料。 (二
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