芦荟苷的提取分离研究.docx

1、化工学院 09 级制药一班 马星 20091413 2011/11/4 芦荟中提取芦荟苷 一、芦荟简介 芦荟属百合科多年生常绿肉质植物 ， 是大自然赐予人类的仙丹草 。这种植 物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。更兼 含有多种有效成分，具有极高的药用价值，显得倍受研究者们的青睐 。 1、种属名称 科中文名：独尾草科 Asphodelaceae 属中文名：芦荟属 (Aloe) 别 名：卢会、讷会、象胆、奴会、劳伟 英 文 名： Aloes 现存芦荟有三百多个品种 ， 被广为利用的主要有库拉索芦荟 ( A loe vera L ) 、木立芦荟 ( A . arborescens

2、 ) 、 好望角芦荟 ( A . ferox Mill ) 、开普芦荟 ( A . af ricana ) ， 被民间少量应用的有皂质芦荟 ( A . saponaria ) 、中华芦荟 ( A . varavia ) 、不夜城芦荟 ( A . nobilis )等 。 2、产地 芦荟 原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物 芦荟本是热带植物，生性畏寒，但也好种活 。 据考证的野生芦荟品种 300 多种，主要分布于非洲等地 ，后传入美洲 。 3、 植物形态 一般芦荟为 常绿、多肉质的草本植物。叶簇生，呈座状或生于茎顶，叶常披针形或叶短宽，边缘有尖齿状刺。花序为伞形、总状、穗状、圆锥形等，

3、色呈红、黄或具赤色斑点，花瓣六片、雌蕊六枚。花被基部多连合成筒状。 4、包含成分 芦荟含有多化学成分， 蒽醌类化合物是芦荟有机活性成分中的最主要部分 。 主要 有芦荟大黄素（ Aloeemodin）、芦荟大黄素甙（ Aloin, Barbaloin）芦荟大黄素甙的异构体异芦荟大黄素 苷 （ Isobarbaloin）、高塔尔芦荟素（ Homonataloin）、大黄酚（ Chrysophanol）、大黄酚葡萄糖 苷 （ Chrysophanol glucoside）、蒽酚（ Anthranol）等 化合物。 5、药用价值 芦荟作为一种天然药用植物 ,已经拥有几千年的发展历史 。 尤其在最近几十

4、年 ,国外对芦荟的研究和开发 速度大大加快 。 其应用范 围不仅局限于初级的护肤保湿化妆品、洗涤用品、保健食品、饮料、茶 等范围 ,而且已涉入到医学领域 。 对人体免疫力的提高、各种胃肠消化道溃疡、便秘、糖尿病、脑心血管疾病、妇科病、皮肤病及一些疑难病症都有明显疗效 。 近几年 ,科学家又发现其具有抗癌作用而且对艾滋病有一定的疗效 ,国际医学论文已发表很多 。 二、 芦荟苷 简介 中文名 :芦荟苷 别名：芦荟素、芦荟大黄素 苷 、芦荟甙 化学名： Aloin； Barbaloin； 1,8-Dihydroxy-10-(beta-D-glucopyranosyl)-3-(hydroxymethy

5、l)-9(10H)-anthracenone； 10-beta-D-Glucopyranosyl-1,8-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)-9(10H)-anthracenone 理化 性质： 芦荟苷为 黄色或淡黄色结晶粉末。 熔点 :148 149 (乙醇 )，一 水合物熔点 70 80。 D+21 (水 ), D-8.3。 略带沉香气味 ,味苦 ,易溶于吡啶 ,溶于冰醋酸 ,甲酸 ,丙酮 ,醋酸甲酯 ,以及乙醇等， 易溶于水 。 化学式 ： C21H22O9 分子量 ： 418.40 芦荟大黄素甙是 芦荟 最基本的成分之一 ,它在芦荟中大量存在 ,不很苦 ,有致泻作用

6、 ,但致泻性较弱 ,只有当芦荟大黄素 苷 被氧化后 ,即转化为芦荟大黄素时 ,不但其苦味增加 ,而且致泻功能也明显增强 。 芦荟 苷 是在人体内寄生菌作用下，水解为芦荟大黄素，这种芦荟大黄素，刺激肠壁蠕动，而对小肠无影响 ,同时由 于透压改变，有利于肠道内废物排除，从而达到刺激性缓泻，这种刺激泻下作用对便秘和痔疮有特殊疗效 。 三、芦荟中芦荟苷的提取 常用的提取方法有两相水解法、亲脂性有机溶剂提取 法 、超临界萃取法等。 总体思路如下 ： 芦荟 风干粉碎 氯仿回流 热过滤 残渣风干 95%乙醇回流洗涤 成盐 加碱（碱溶酸沉） 沉淀 蒽醌化合物 分离 芦荟苷 1、芦荟苷的检验 （ 1） Feig

7、l 反应： 取精制芦荟苷的水溶液 1 滴 ,加入 25%碳酸钠水溶液、 4%甲醛溶液及 5%邻二硝基苯溶液各 1 滴 ,混合后置水浴上加热 ,于 1-4 min 内产生显著紫色。 （ 2） Borntragers 反应： 取精制芦荟苷晶体 ,加 10%硫酸溶液 5 mL,置水浴上加热 2-10min,放冷后 ,加乙醚 2mL 振摇 ,静置后分取醚层溶液 ,加入 5%氢氧化钠水溶液 1mL,振摇 ,醚层由黄色褪为无色 ,水层显红色。 （ 3） 硼砂反应： 取芦荟苷水溶液 5mL,加硼砂 0.2g,加热溶解 ,取溶液数滴 ,加入蒸馏水 10mL,水中可见绿色荧光。 （ 4） 薄层色谱 检验：取样品

8、 粉末 0.5g，加甲醇 20ml，置水浴加热到沸，振芦荟苷 摇数分钟，滤过，滤液作供试液；另取芦荟苷 加甲醇制成每 1ml 含 5mg 的溶液，作对照品溶液，分别点样于同一硅胶 G 薄板上，以醋酸乙酯 -甲醇 -水（ 100：17： 13）展开，取出晾干 ，喷以 10%氢氧化钾醇溶液，置紫色光灯（ 365nm）下检视，供试液色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 2、芦荟苷的提取 本次试验 介绍使用连续回流法提取芦荟苷， 通过 此法提取的产物，数量有限，只能在实验室进行小规模的提取，虽然过程稍显复杂，但提取物含量高，便于研究。 预处理： 芦荟叶片若干 洗净 切片风干 粉碎 粉

9、末用 5%醋酸酸化 表面皿风干 工艺流程 ： 芦荟粗粉 三氯甲烷回流 2h 震荡，热过滤 滤渣 滤液 挥发 三氯化铁 95%乙醇水浴回流 4h，热过滤 残渣 滤液 5%氢氧化钾溶液 调节 pH 为 9-10 静置 30min 后过滤 沉淀 滤液 95%乙醇洗涤 3 次 洗涤液 减压浓缩 蒽醌苷的钾盐 95%乙醇，冰醋酸调节 pH 至中性 水浴加热，热抽虑 沉淀 滤液 浓缩 醋酸铅试液 出现沉淀，过滤 沉淀 滤液 蒸馏水洗涤，过滤 残渣 滤液 1%氢 氧化钠调 pH 至中性 重结晶 冰浴滤过 粗芦荟苷晶体 具体说明 ： 将风干后的芦荟粉末，加三氯甲烷回流提取 2h，振摇，趁热过滤，残渣上三氯甲烷

10、挥干。将残渣置于索式提取器中，用 95%乙醇水浴回流提取 4 h，趁热过滤，滤纸用 95%乙醇洗涤 3 次，弃去滤渣，向滤液中缓慢加入 5%氢氧化钾溶液，用玻璃棒搅拌，同时调节 pH 值至 910,静置 30 min 后滤过，沉淀以 95%乙醇洗涤 3 次，合并洗液，置真空干燥箱中，以 0. 8MPa、 6070减压浓缩至干，得总蒽醌苷的钾盐。 再加入 95%乙醇，使沉淀悬浮于乙醇中，缓慢加入冰醋酸，调节 pH 值至中性，水浴加热 ,趁热抽滤，滤液浓缩，浓缩液加醋酸铅试液，振摇混匀，待沉淀不再继续出现，滤过，沉淀以蒸馏水冲洗 3 次，过滤 ， 滤液用 1%氢氧化钠调 pH 值至中性，重结晶，冰

11、浴滤过，所得晶体为粗制芦荟苷。 3、 精制 将所得晶体溶解于 70%甲醇中 ,溶液上 Sephadex LH220 凝胶柱层析 ,以 70%甲醇洗脱 ,分段收集。所洗脱依次得到 :芦荟大黄素双葡萄糖苷、大黄酚葡萄糖苷、芦荟苷。后段收集淡黄色结晶 ,减压浓缩至干 ,即得到精制芦荟苷结晶。 四、芦荟苷的结构分析 1、定性分析 （ 1）紫外光谱检测 从芦荟苷紫外光谱图 可知 样品 芦荟苷 在 297nm、 356nm 处有吸收峰与文献 【 1】基本一致。 （ 2）阴性干扰实验 分别取阴性对照品 溶液、 芦荟苷对照品 溶液、 芦荟苷样品 溶液各 10 L，注入液相色谱仪测定。结果阴性对照品溶液在 乙醇

12、芦荟苷 色谱峰相应位置上无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰 。 芦荟苷紫外光谱图 阴性对照品溶液 2、定量分析 采用 HPLC 法对芦荟苷进行含量测定，色谱条件为：流动相甲醇 水 冰醋酸（ 42:58:0.5）， 流速 1mL min，检测波长 359nm，样品溶液过 0.45 L微孔滤膜，进样 10 L，用 HPLC 法测定峰面积，外标一点法计算各个因素条件下的提取芦荟苷的百分含量（提取率）。 将粗提取 晶体溶解于 70%甲醇中 ,溶液上 Sephadex LH220 凝胶柱层析 ,以70%甲醇洗脱 ,分段收集 。后段淡黄色晶体即为芦荟苷， 将该色带刮下来，置三角瓶 中，用乙醇洗至硅胶粉无色为

13、止，然后将乙醇液浓缩至一定体积，备用。 3、单因素对提取率的影响 （ 1） 乙醇浓度对提取率的影响 选择适当的溶剂对中药有效成分的提取是很重要的，最常用的溶剂是水和乙醇。在料液比为 1:10，提取 1 次，提取时间 60min，考察不同乙醇浓度对芦荟苷的提取率影响， 结果如 图 芦荟苷对照品溶液 芦荟苷样品溶液 由此 可知，芦荟苷的提取率都随乙醇浓度的升高而有所增加。在 50乙醇浓度时达到最高，但在 40 60内变化不大，乙醇浓度 60 70时提取率下降较快，因此选择乙醇浓度为 40 60。 （ 2） 料液比对提取效果的影响 固定乙醇浓度 50，提取 1 次， 提取时间 60min， 考察 不

14、同料液比对芦荟苷提取率的影响，结果如图 随着溶剂量的增加，芦荟苷的提取率升高，溶剂量超过 15倍量时溶剂量增加而提取率提高不多 。 （ 3） 提取时间对提取率的影响 固定溶剂 50乙醇，料液比 1:10，回流提取 1 次，考察不同提取时间对提取率的影 响，结果如 图 可知，芦荟苷在 60min 左右提取率达到最大，超过 60min 芦荟苷含量反而下降，提取时间增大可能使芦荟苷受到破坏。 （ 4） 提取次数对提取效果的影响 多次提取有利于植物体中天然物的提取。在固定乙醇浓度 50，料液比 1:10，提取时间 60min，考察不同提取次 数对提取效果的影响，结果如图 可知，提取次数的增加，芦荟苷的

15、提取率增加，提取 2 次芦荟苷含量最高，超过 2 次芦荟苷提取率下降，提取次数以 2 次最佳。 参考文献 1陈金东 ,李蔚 ,李素云 .高效液相色谱测定芦荟胶囊中的芦荟甙 J.色谱 ,2002,20(4):367-368 2万金志， 乔悦昕 .芦荟的化学成分及其研究 J.1990,0(2):51 153 3张翠利 ， 李锟 ， 李钦 .芦荟中芦荟苷提取工艺研究 J.亚太传统医药，2008,6(8) 4王书杰 ,肖金鱼 ,王秀花 .不同品种芦荟中芦荟苷的含量测定 J.药物研究 ,2011,20(16) 5徐文广 ,林 佳 ,魏艳芬 .芦荟中芦荟苷的提取分离 J.企业技术开发，2011,30(12) 6付银龙 ,钱和 .芦荟 甙 的提取与检测 J.江苏食品与发酵 ,2002,0(2) 7国家药典委员会 .中国药典 S.一部 .2005:112 113