精选优质文档-倾情为你奉上DNA斑点杂交系列(一)-实验方法点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如Minifold和、Bio-Dot（Bio-Rad）和Hybri-Dot,它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。（1）DNA斑点杂交：先将膜在水中浸湿，再放到15SSC中。将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上，每个样品一般点5l（2-10g DNA）。将膜烘干，密封保存备用。（2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10g总RNA（经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化），方法是将RNA溶于5l DEPC水，加5l甲醛/SSC缓冲液（10SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA变性，然后取5-8l点样于处理好的滤膜上，烘干
