紫外分光光度法测定胆南星中总胆酸的含量.DOC

1、 1 紫外分光光度法测定胆南星中总胆酸的含量 万军 ， 翟羽佳 ， 闫翠起，贾程程 西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031 摘要 目的：建立中药 胆南星 中总胆酸含量测定的方法。方法：以 鹅去氧胆酸 为对照品，直接采用加入 50 硫酸溶液， 75水浴加热反应显色，于紫外分光光度计 377 2 nm 波长处测定。结果： 鹅去氧胆酸在 0.0000 0.4312mg/mL，呈良好线性关系 （ r=0.9991） ，平均回收率为 98.79 （ n=5） ， RSD 为 3.02。结论：本方法准确，简便，重复性好，可用于 中药 胆南星 中 总胆 酸含量测定。 关键词 胆南星；鹅去氧

2、胆酸；总胆酸；含量测定；紫外分光光度法 Determination on the contents of total bile acid in Bile Arisaema by UV WAN Jun， ZHAI Yu-jia， YAN Cui-qi， JIA Cheng-cheng Life Science CDCA; Total bile acid; Determination;Ultraviolet spectrophometry 胆南星系由天南星科植物 天南星 Arisaema erubescens（ wall.） Schott.、 异叶天南星 A.heterophyllum Bl.或东

3、北天南星 A.amurense Maxim.的干燥块根细粉与牛、羊或猪胆汁炮制加工而成 ， 胆汁制南星，既可减低生南星毒副作用，又使其药性由温转凉，变温化寒痰药为清化热痰、息风定惊之品，用于治疗痰热咳嗽 、咯痰黄稠、 中风痰迷，癫狂惊痫等症。 中国 药典 2005版一部主要针对原药材 进行 显微和理化鉴别 1，而未对成品中的胆汁质量进行控制。 笔者 采用鹅去氧胆酸作为胆南星中总胆酸含量的评价指标，建立专属性较强的含量测定方法， 拟 有效控制胆南星的内在质量 ，使标准更加完善 。 1 仪器与试药 TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司） ； Sartorius B

4、S 224 S（德国赛多利斯公司 ） 精密电子天平 ； SK8200LH 超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；【收稿日期】 2010-1-13（ 009） 【第一作者】 万军 ， 男 ， 西南交通大学 生命科学与工程学院 讲师，博士学位，主要从事中药新药研究与教学工作 ； E-mail： 2 DK-98-1 型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司） 。 胆南星， 由成都 中药饮片 有限公司提供，批号 090802， 091001， 091002， 091101、 091102、091103； 鹅去氧胆酸对照品购自中国药品生物制品检定所， 供含量测定用， 批号110806-200704；

5、其余试剂均为分析纯 。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取鹅去氧胆酸对照品 10.0mg，置 10mL 容量瓶中，加冰醋酸制成每 1mL 含 1mg 鹅去氧胆酸溶液，即得对照品溶液。 2.2 供试品溶液的制备 2 3 取胆南星样品粉末 1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加乙酸乙酯 80mL，水浴回流 2.5h，于提取结束时加入 0.6g 活性炭，继续回流 0.5h，滤过，滤液水浴蒸干，用 60%的冰醋酸溶解，并转移至 25mL 容量瓶中，定容，摇匀（依情况进行过滤），精密吸取此溶液 1.0mL，置 20mL 带刻度试管中， 加入 50%硫酸溶液 14mL，混匀，置 75水浴中保温

6、 10min，迅速移至冰浴中放置 2min，即得。 2.3 检测波长的确定 按供试品溶液的制备方法， 以 60%冰醋酸溶液作为空白 。将对照品溶液、 供试 品溶 液在 200 400nm波长范围内进行光谱扫描。结果供试液和对照溶液在 377n m处有最大吸收 ， 故 选择 377nm 波长作为测定波长。见图 l。 A B 图 1 UV 光谱图 A.对照品 B.样品 2.4 标准曲线的制备 分别精密吸取 0.0， 1.0， 1.5， 2.0， 2.5， 3.0， 3.5mL 的鹅去氧胆酸对照品溶液（ C 0.1232mg/mL）置 20mL 带刻度的试管中，以 60%冰醋酸溶液作为空白 ，依法测

7、定 吸光度，以吸光度 A 为纵坐标，对照品浓度 C 为横坐标，绘制标准曲线，回归方程：A= 1.263C +6.9 10-3， r=0.9991。结果表明鹅去氧胆酸在 0.0000 0.4312 mg/mL 的范围内线性关系良好。 2.5 精密度 、 重复性 、稳定性 精密称取 胆南星 样品粉末 ，按 供试品溶液 制备方法制备 ，以 60%冰醋酸溶液作为空白对照液 ， 在 377nm 处测定其吸收度 ， 重复测定 5 次， RSD=0.14，表明仪器精密度良好。 精密称取 胆南星 样品粉末， 5 份， 测定 ， 平均值为 78.49mg/g， RSD=0.67， 结果表明该方法重 复性 良 好

8、。 3 取同一份样品，依法操作， 在 0.0， 0.5， 1.0， 1.5， 3.5， 6.0h 时间在 377nm 处测定吸收度， RSD=2.89， 表明供试品溶液在 6h 内 测定 基本 稳定。 2.6 加样回收率试验 取 胆南星 样品粉末， 5 份，精密称定， 分别 加入 鹅取氧胆酸 对照品适量 ， 依 法操作，在 377nm 处测定其吸收度，结果 平均 值 为 98.79， RSD=3.02 。 2.7 样品测定 按照以上方法测定 6 批 胆南星样品 （ 090802、 091001、 091002、 091101、091102、 091103） ，结果 总胆酸含量以鹅去氧胆酸计分别

9、为 78.5， 104.6， 91.7， 85.2， 88.3，90.0mg/g，平均值为 89.7 mg/g（ n=6）。 3 讨论 3.1 指标成分的选择 目前， 对胆南星中的胆酸质量控制 研究较少，主要 集中在薄层色谱鉴别 及胆汁化学成分的分析 4 6，尚未见胆南星中总胆酸含 量的仪器分析报道。 根据张能荣研究的牛、羊、猪胆汁的 15种成分的结果，只有鹅去氧胆酸是 3种胆汁共有成分 7， 因 此，采用鹅去氧胆酸 作为指标成分， 对胆南星 中总胆酸的含量进行测定。 3.2 供试品溶液的制备 3.2.1 提取溶剂考察 8 以 60%冰醋酸溶液为空白，用 UV 法在 200 400nm 波长间

10、扫描 各 样品的最大吸收波长， 并 在 （ 377 2） nm 处进行含量测定，结果氯仿 +乙醇（ 2： 1， V/V）作为提取溶剂，胆酸的浓度最高 （ 0.548 mg/mL） ，但 UV 扫描得到其最大吸收波长为 292nm，与对照品的最大吸 收波长 （ 377 2） nm 不符，乙酸乙酯与对照品的最大吸收波长 亦 不符，故 不予采用；氯仿作为提取溶剂，提取液进行 UV 扫描得到其最大吸收波长为 377nm，但由于其稳定性差（ 样品放置 20min，其最大吸收波长变为 292nm），同时考虑氯仿毒性较大，不建议采用 。 因此，选用乙酸乙酯 +活性炭为提取溶剂。 3.2.2 提取时间考察 分

11、别 采用 乙酸乙酯回流提取 1.5， 2， 2.5， 3.5h， 依法操作 ， 并在(377 2)nm 处进行吸光度的测定，结果 回流时间 4h，胆酸成分的浓度最大 （ 0.3300 mg/mL） ，但进行 UV 光谱 扫描得到其最大吸收波长为 292nm，与对照品的最大吸收波长 (377 2)nm 不符， 而提取 3h，其最大吸收波长仍在 376nm 处 ；因此，提取时间定为 3h。 3.2.3 提取方法考察 参考文献 3， 5， 8，胆酸成分的提取多 采 用水浴回流法，故实验选用回流法 ，不再进行提取方法的考察 。 3.3 活性炭用量考察 实验发现 活性炭的加入对胆南星提取液中的干扰成分有

12、较好的吸收 ，而对胆酸类成分吸收较小，且活性炭用量对最大吸收波长有一定影响。 参考活性炭常用量，选用 0.35g 及 0.6g 作为考察水平。结果表明：加入 0.35g 活性炭，其最大吸收为 (291 2)nm 波长处；而加入 0.60g 活性炭得到的供试品溶液，进行 UV 光谱扫描，其最大吸收为(377 2)nm 波长处，与对照品光谱扫描结果一致，且稳定性及重复性好，故 活性炭用量为0.60g。 3.4 高效液相色谱法（ HPLC） 测定鹅去氧胆酸含量 实验曾探索采用 HPLC 测定样品中 鹅去4 氧胆酸含量 9 10。 色谱条件：岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪，色谱条件： KP100

13、-5C18色谱柱（ 4.6mm 150mm， 5 m），柱温： 35；流动相甲醇 -水（ 70： 30）；流速 0.8mL/min；检测波长： 203nm。 精密吸取的鹅去氧胆酸对照品溶液 10 L 进样， 结果 在 60min 仍 没有 色谱峰出现，后又将流动相 调整 为甲醇 -水（ 82： 18），依然没有峰值检出 。 后考虑到胆汁酸类成分无紫外吸收基团，故采用 柱前 衍生法对具有紫外吸收基团的衍生产物进行色谱检测 11，以对溴乙酰基硝基苯为衍生化试剂， 18-冠醚 -6 为相催化剂 。 但 经多方联系， 均 未购买到 18-冠醚 -6，故 其实验研究待下一步展开 。 【参考文献】 1 中

14、华人民共和国药典委员会 .中国药典 S.北京：化学工业出版社， 2005： 110. 2 赵 中杰， 江佩芬 ，罗金明，等 .紫外分光光度法测定牛黄中胆酸的研究 J.天然产物研究与开发 ， 1992， 4（ 1）： 24. 3 李先端，钟银燕，游修琪 ，等 .中药炮制辅料牛胆汁中总胆酸含量测定 J.中药材 ， 2008，31（ 5）： 654. 4 贲永光 ， 李康 ， 李坤平 ，等 .胆南星的薄层色谱鉴别 J.广东药学院学报 ， 2009， 25（ 2）：160. 5 张绍轩，黄青，王学农 ，等 .胆南星的薄层色谱鉴别 J.长春中医药大学学报 ， 2008，24（ 4）： 147. 6 张厚

15、宝，康纯 .胆南星中胆汁成分的检测 J.中药材 ， 1991， 14（ 3）： 37. 7 张能荣 .牛羊胆汁质量的研究 J.中草药， 1983， 14(7)： 15. 8 何念民 .紫外分光光度法测定消溶胆石片中胆酸含量 J.中成药， 1995， 17（ 1）： 18. 9 郑兴 .熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸的对比研究 J.内蒙古科技与经济， 2008， 2（ 156）：28. 10 唐玉红 .HPLC法测定熊去氧胆酸的含量 J.现代仪器， 2007， 1： 62. 11 郑兴，金东日 .柱前衍生反相高效液相色谱法测定鹅去氧胆酸的含量 J.延边大学学报（自然科学版 ）， 2008， 34(4)： 269.