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定量PCR分析的相对定量法.docx

定量PCR分析的相对定量法预先研读科研文献,提出问题。拟用60Co-Y射线照射HeLa细胞,经0,2,4,8,lOGy不同吸收剂量照射4小时后,研究60Co-Y射线对GRP78mRNA表达水平的剂量影响关系。设计拟扩增GRP78以及GAPDH(内参基因)引物序列,稀释合成后引物,验证是否合格能用,储存备用。上下引物可以考虑预混,储存备用。准备总RNA提取试剂盒,熟悉实验方法,即熟悉基本步骤与相应所用耗材,准备所用耗材。知道经该试剂盒方法提取后实际剩下的总RNA体积数。先培养二瓶细胞,长满后消化后混合,细胞计数,分成6瓶细胞,接种培养至第二天早晨。编号。送去钻源室60Co-y射线照射,无菌操作,放回培养4小时。按试剂盒程序提取各瓶细胞总RNA。编号,测定并记录各管总RNA含量与体积数。当天反转录成cDNA,并编号,测定总cDNA含量与体积数。预约定量PCR仪器使用时间。做5X6X2=60份定量PCR反应计划,因有5个剂量组,每一个剂量组做6次平行,2个基因。考虑额外需要,故预混试剂拟按70份反应计划去准备。做好96孔板中各孔排布图。配制除样品cDNA和引物外的

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