1、 肠上皮细胞肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECS)是具有极性的柱状上皮细胞,参与肠道的消化、吸收、分泌、免疫屏障和应激反应等,黏膜上皮内含有大量的免疫细胞和免疫分子,是机体内最大的免疫组织。IEC是体内更新最快的一类细胞,对维持肠上皮的功能有重要作用。其快速更新的特性,使其成为研究细胞增殖和分化调控机制、营养素对肠上皮的作用、细胞信号转导、肠道免疫等提供了理想的体外模型。胶原酶消化法得到的兔IEC鸡胚盲肠上皮细胞呈铺石路生长(400)准备工作1、对 用到的 的 、 、消 2、 养 和其 的 制、分3、 的 与消 4、 养 其 的 与调IEC的 养 肠 细
2、胞 细胞currency1 细胞“生长 细胞currency1 细胞 细胞fifl酶原 养 酶 养IEC的养分为原养和养。分细胞”养为原养,一养的1与10内的细胞为原细胞养的原养细胞(细胞)”,为细胞养。IEC的分 法机 法 酶 法 法酶消化法胶原酶和性酶 法胶原酶消化法 酶法IEC 养的素、 生 的新生大 最 。对 的新大 ,分 养 使用的 养、细胞 an s 和组织分应 的 生素。、消化酶的 用 酶消化组织, h,分得到的大分为细胞,“和生长能。胶原酶 与性酶I的 使用, 消化4 min可得到IEC团块,其“能 强,长状态良 ,还可减轻对细胞 性损害,缩短消化作用时间, 肠绒毛细胞团的产率
3、 高。用 酶作为分 IEC的消化酶,经简便纯化,可获得 纯的IEC。3、血 使用胎血 不宜 高, %- %胎血 常使非肠黏膜上皮细胞增殖。IEC体外 养 用的胎血 的 一不 %。4、IEC的纯 少量异 细胞的对IEC生长繁殖也是重要的,为IEC与间质细胞在相互作用关。同时应防止其 繁殖,如降低FCS 可减少成纤维细胞和平滑肌细胞增殖。应用肝素可抑制平滑肌样细胞生长,促IEC生长增殖。、 养 养 新鲜 制为佳,低 4 储不宜 周。EGF对于促IEC“十分重要,它与 岛素 用可促IEC生长繁殖。生长 表皮生长子、 岛素和谷氨酰胺等更利于原 养的上皮细胞生长。6、酸碱 最适p 细胞不同 种属不同而异。最适p 有利于细胞本身的酶 其 生长子发挥的效果,从而体外 养细胞的生。IEC 养最适p 值为7 7 4。