1、 产青霉素酶菌种的分离、纯化及活性测定目录实验原理实验内容实验结果讨论 实验原理 青霉素酶又称-内酰胺酶(-lactamase,EC3.5.2.6),可水解-内酰胺类抗生素。利用青霉素酶具有水解-内酰胺类抗生素的特点, 可将其用于抗菌药物筛选。 枯草芽孢杆菌是常见的青霉素酶分泌菌种，革兰氏阳性菌，属芽孢杆菌。无荚膜，周生鞭毛，能运动；芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。实验原理 紫外线作为物理诱变因子对诱变 有 的 长是在253-265 nm。紫外线诱变的 生物 是 于DNA 变化 成的，DNA 对紫外线有 的 作用， 其
2、是 基中的 ， 为 。 在 酶活 诱 时， 用 测定，对currency1。青霉素在 性“水解，生成的青霉fifl在fl性“ 定的 作用， 的 用fl 定，时白验。实验内容” 中分离菌种1、青霉素 液的称0.625g 160位/0.96g青霉素 解于10ml生理水中， 10位/ml的青霉素。2、 ，10g，75水 20min，1ml 液 1000 ，1ml 液到100ml”1000、2000、5000位液体培养基， 培养，为实验 用菌液。3、菌液分 种到1000位，2000位，5000位的培养基，37培养24h。5.5000位的菌， 诱 1位。 实验内容” 筛选菌种1、 的菌落”5000位 革
3、兰氏 色， ，将形状为杆状的菌落 。”1 ”2 ”3 定”4 色”5水 ”6 ”7 2、将筛选 的菌种 到 面培养基”4实验内容” 酶活 的测定1、菌体 培养物， 种 培养基内，在25 培养24时， 培养基中菌液15ml，4000r/min离15min， 菌体， 液 。2、称青霉素” 适，用磷fl缓冲液(pH7.0)， 解成每1ml中青霉素1位的 液。另粗酶 液， 估位用磷fl缓冲液(pH7.0) 1000 ，在37预 。实验内容3、精密青霉素 液50ml,置100ml中，预 37后，精密入已预 的青霉素酶 液25ml，迅速混匀，在37确放置1时，精密3ml，立已精密的 定液(0.01mol/
4、L) 25ml中,在室温暗处放置15分钟，用fl 定液(0.01mol/L) 定，近终点时， 粉指示液，继续 定颜色消失。4、已预 的青霉素 液2ml，在37放置1时，精密入 定液(0.01mol/L)25ml，然后精密粗酶 液1ml，在室温暗处放置15分钟，用fl 定液(0.01mol/L) 定。 白 定消耗。实验内容式currency1E(BA)MFD100式中E为青霉素酶活 ，位(ml.时)；B为白 定 消耗的 fl 定液的容，ml；A为 定 消耗的 fl 定液的容，ml；M为fl 定液的浓度，mol/L；F为在相“，每1ml的 定液(0.01mol/L相当于青霉素的 价位”742D为青霉素酶 液的 数。实验内容”四诱变育种1、将之前种的10000位的菌种 种在250ml液体培养基里面 培养18h。2、将管里的菌液 到100位/ml。3、将 后的菌液铺”3ml)在6灭菌的 ，分 于紫外灯射0min、1min、3min、5min、7min、9min。4、射后的菌液分 布在有青霉素10000位/ml、15000位/ml的 体培养基 ，于37培养箱 ，之后观察菌落生长情况。5、长 来的菌落在液体培养基里面培养48h，培养液 测酶活， 结论。
