武汉大学天然产物的提取葛根.ppt

1、葛根及葛根素的提取,武汉大学天然产物化学及提取学号：200622030127,主要内容：,葛根简介主要成分药理作用提取方法分离方法含量测定方法开发前景,葛根简介,葛根始载于神农本草经,被列为中品。为豆科野葛或甘葛藤的干燥根。目前,在我国为药食两用的植物。它具有解肌退热、生津止渴、透发麻疹升阳止泻的功能。葛根中主要含有葛根素(puerarin)大豆苷(daidzin)和大豆苷元(daidzein)等异黄酮类有效成分。该成分都具有增加脑血流、改善微循环等功效。,葛根及其提取物:,葛根的主要成分,葛根的主要有效成分是大豆苷元，大豆苷，葛根素和大豆苷元4,7二葡萄糖甙等异黄酮类化合物。除这4种主要的黄

2、酮物质之外,日本学者柴田承二等还从葛属植物P.Thunbergiana Benth等品种分离得到葛根素7木糖甙;Bhutain等从葛属植物P.Tuberosa中分离得到另一种新的异黄酮类物质4,6二乙酰基葛根素；野原稔弘等还首次从葛根中分离鉴定出金雀黄素8芹糖基葡萄苷和大豆黄素8糖基葡萄苷两种异黄酮物质。除上述主要有效成分异黄酮类化合物外,葛根中还含有少量的葛根苷(A，B，C)，三萜类物质(葛皂醇A，B，C)和生物碱类物质葛根的主要有效成分中以葛根素含量为最高,葛根的药理作用,改善心脑血管系统降血糖降血脂抗氧化抗肿瘤抑制血小板聚集增强免疫功能改善学习记忆,改善心脑血管系统,降低血压，减慢心率，

3、降低心肌耗氧量： 葛根对正常和高血压动物均有一定的降压作用，葛根黄酮和葛根素使正常和心肌缺血狗心率明显减慢。扩张冠状血管，改善正常和缺血心肌的代谢：葛根总黄酮和葛根素明显扩张冠状血管，可使正常和痉挛的冠状血管扩张，且其作用随着剂量的增加而加强,降血糖降血脂,口服葛根素能使四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖明显下降,血清胆固醇含量减少,当选用最低有效剂量的葛根素与小剂量(无效量)阿司匹林组成复方后,降血糖作用加强,且可维持24h以上,并能明显改善四氧嘧啶性小鼠的糖耐量,明显对抗肾上腺素的升血糖作用,且认为葛根素可能是葛根治疗糖尿病的主要成分，口服葛根煎液能对抗饮酒大鼠因乙醇所致的血中APOA1降低及胆固醇

4、，甘油三酯的升高现象。,抗氧化,体内外实验表明,葛根异黄酮明显抑制小鼠肝，肾组织及大白兔血，脑组织的脂质过氧化产物丙二醛的升高,且对提高血，脑组织中超氧化物歧化酶活性有极显著作用。本品能通过清除氧自由基和抗脂质过氧化而使酒精所致的血液粘度异常变化恢复正常状态。,抗肿瘤,大豆苷元可抑制白血细胞HL60的增殖,大豆苷元在1020mg/ml浓度范围内明显抑制黑色素瘤B16细胞的增殖。另外,葛根提取物对ESC癌S18O肉瘤及Lewis的肺癌均有一定的抑制作用。,抑制血小板聚集,葛根素浓度为0.25，0.5及1.0mg/ml时，在试管内均能不同程度地抑制ADP诱导的鼠血小板聚集静脉注射葛根素亦有抑制作用

5、，葛根素浓度为0.253.0mg/ml在试管内对ADP和5-HT诱导的家兔，绵羊和正常人的血小板聚集也有抑制作用，葛根素0.5mg/kg还能抑制5-HT从血小板中释放，这对于治疗心绞痛和心肌梗死很有意义。,增强免疫功能,葛根使巨噬细胞(M4)的异物吞噬功能活化,而使初期感染状态下的异物排除功能增强;同时通过活化的M4对细胞性免疫施以影响。,改善学习记忆,据刘干中等用小鼠跳台法和大鼠操作式条件反射法观察了葛根醇提取物及总黄酮对动物学习记忆功能的影响结果,两者均能对抗东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍和40%乙醇所致的记忆再障碍,葛根醇提取物尚能对抗东莨菪碱所致的大鼠操作式条件反射的抑制研究发现,东莨

6、菪碱能降低小鼠大脑皮层和海马乙酰胆碱含量,并降低海马乙酰胆碱转移酶活性，这可能是葛根能改善学习记忆作用的机制。,葛根素提取方法,渗漉法冷浸法回流法提取法酶提取法超声提取微波提取,渗漉法:,取100g葛根粉碎药材，装渗漉筒，加95%乙醇300mL浸泡12h，再加乙醇至600mL进行渗漉，将所得渗漉液抽滤，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏状，然后真空干燥得干浸膏，称重。,冷浸法:,取100g葛根粉碎药材置500mL圆底烧瓶中，加95%乙醇200mL浸泡12h，抽滤，滤液保留，药渣加200mL95%乙醇浸泡12h，抽滤，滤液保留，药渣再加200mL95%乙醇浸泡1h，抽滤，滤液合并，回收乙醇并浓缩至稠膏状，

7、后真空干燥得干浸膏，称重。,回流法：,取100g葛根粉碎药材置500mL圆底烧瓶中，加300mL95%乙醇回流1h，抽滤，滤液保留，药渣加300mL95%乙醇回流1h，抽滤，滤液合并，回收乙醇并浓缩至稠膏状，后真空干燥得干浸膏，称重。,葛根总黄酮分离方法：,1 大孔树脂法 2 铅盐沉淀法,大孔树脂法 ：,崔九成等用大孔树脂分离葛根素，将浓缩至1ml相当于0.5g葛根药材的提取物100ml，加入到50g处理过的大孔树脂柱上，用蒸馏水洗至流出液色变淡，再用70%乙醇洗脱至无葛根素，洗脱液回收乙醇浓缩并蒸干即得葛根总黄酮，收率为药材总黄酮的84.58%,铅盐沉淀法,李稳宏等用铅盐沉淀法对葛根黄酮进行

8、分离，将醇回流法所得浓缩物用95%乙醇溶解，加入饱和中性醋酸铅溶液至不再有沉淀生成为止，过滤，沉淀用水洗23次，弃去滤渣，滤液与洗液合并，再加入碱式醋酸铅溶液，至不再有沉淀生成，将沉淀物干燥后悬浮于300ml 95%乙醇中，通入H2S脱铅过滤后，沉淀用醇洗23次，合并滤液与洗液，调pH为6.57.0，减压浓缩回收乙醇至50ml左右，转移至蒸发皿中，真空干燥，得总异黄酮为浅棕色粉末。铅盐沉淀法得到的成品中总异黄酮含量高，可达62.81%，但其收率较低。,葛根素含量的测定,1高效液相色谱法2薄层扫描法3紫外可见分光光度计法,高效液相色谱法,葛根素对照品(中国药品生物制品检定所提供)；甲醇(色谱纯)

9、；磷酸(优级纯)；重蒸蒸馏水，样品为含有葛根素的保健食品，所用的溶剂和溶液在分析前都要经过0.45m滤膜过滤。,色谱条件 ： 色谱柱用DiamonsilTM C 1854.6mm250mm柱;柱温为室温;流动相用甲醇：水=30：70(v/v;用磷酸调节pH值为3.0);流量为1.0mL/min-1;检测波长250nm;进样量0.530L,标准溶液的制备 ： 准确称取干燥恒重的葛根素对照品适量(精确至0.0001g)于容量瓶中，加流动相配制成每1mL含10g左右的溶液即得.将以上标准液准确进样0.530L，以峰面积为横坐标，葛根素含量为纵坐标绘图，制得标准曲线Y=Ax+B， r0.999990

10、(实验中可得到A，B的值)葛根素在试验确定的范围内呈良好的线性关系，即得标准色谱图及样品色谱图，从而计算出葛根素的含量。,2 薄层扫描法,取上述各提取方法中干膏一定量(相当于2g药材的浸膏量)，用薄层扫描法，以药材葛根素含量为对照测定各方法干膏中葛根素的含量，将所称取的干浸膏分别溶于95%乙醇中，定量转移至100mL容量瓶中，加乙醇至刻度定容，摇匀即得。TLC条件:硅胶G板，氯仿-甲醇-水(7：2.5：0.25)为展开剂。扫描条件:S=265nm， R=365nm;点样量:1L;标准品对照:葛根素(0.28mg/mL)，并以药材葛根素含量为100%，得到各提取方法的相对回收率,3 紫外可见分光

11、光度计法,标准曲线的制备 ： 精密称取对照品葛根素5mg于25ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml置于10ml量瓶中，各加乙醇1.0ml，再用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，以乙醇溶液作空白对照，在250nm处测定吸收度(A)，以吸收度与浓度(C)回归得曲线:A=0.073898C-0.0308，r0.9990,含量测定: 精密称取干浸膏样品约30mg于50ml量瓶中，加95%乙醇2030ml，超声振荡使其溶解，冷却后加95%乙醇至刻度，摇匀精密吸取1.0ml置于25ml量瓶中，加水至刻度，同时吸取1.0ml乙醇同法处理作空白对照，于250

12、nm处测定吸收度，由回归方程计算总黄酮的含量,葛根的开发前景,葛根药用价值较大，具有多种药理作用，并且具有毒性低,安全范围广,药源丰富的优点。葛根素,葛根甙元在体内分布广且快，消除也快，不易积累，无代谢饱和现象，为临床安全合理用药提供了重要依据.国内外已将葛根开发各种保健品，作为一种尚未完全开发利用的天然野生植物资源，随着其药理，药化，临床应用，有效成分提取，检测等方面研究的不断深入，其药理功能，保健作用和应用价值将会日益引起人们的重视。葛根将会更加引人注目，加强对葛根的研究，开发各种药用制剂和保健食品必将具有重要的社会意义和经济价值.,参考文献：,董丽萍.葛根对免疫机制的作用J.中国药理学报

13、，1998，19(4):339 范礼理.葛根黄酮对犬冠脉心脏血液动力学和心肌代谢的作用J.中华医学杂志，1995，11:724曾贵云.葛根的药理研究葛根对犬血压血管反应性脑循环及外周循环的作用J.中华医学杂志，1994，265 岳江文，胡小琴.葛根及葛根素对心血管系统的药用价值J.中国中西医结合杂志，1996，16(6):38梁桂贤,李勤 葛根黄酮提取分离方法及制剂研究进展，山西中医学院学报 第2卷 第4期 2001年李稳宏,李剑君,高新.葛根中有效成分总异黄酮提取工艺研究J,西北大学学报(自然科学),1998,28(2):131134.赵浩如,郜凤香.葛根总黄酮的提取方法研究J.中成药,2000,22(11):756758.崔九成,蒙跃尤,杨匀.大孔树脂分离葛根黄酮研究,西北药学杂志,1999,14(4)454255. 鄢贵龙,葛根素的提取及纯化技术, 氨基酸和生物资源2004,26(3):3841赵丽娟,王翠艳,陈崇军.葛根总黄酮的两种不同提取方法比较J.鞍山钢铁学院学报,2002,25(2):105107.,Thank you !,