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人p38丝裂原活化蛋白激酶ELISA试剂盒说明书.DOC

1、人p38丝裂原活化蛋白激酶ELISA试剂盒说明书检测范围: 96T2 U/L -48 U/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 p38 丝裂原活化蛋白激酶水平。用纯化的人p38 丝裂原活化蛋白激酶抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入p38MAPK,再与 HRP 标记的 p38MAPK 抗体结合,形成抗体-抗原- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

2、p38MAPK 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,通过标准曲线计算样品中人 p38 丝裂原活化蛋白激酶 浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 标准品(96U/L) 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔8 条 9 标准品稀释液 1.5ml1 瓶4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求 1 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不

3、能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融2 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。48 U/L 5 号标准品 150l 的原倍标准品加入 150l 标准品稀释液24 U/L 4 号标准品 150l 的 5 号标准品加入 150l 标准品稀释液12 U/L 3 号标准品 150l 的 4 号标准品加入 150l 标准品稀释液6 U/L 2 号标准品 150l 的 3 号标准品加入 150l 标准品稀释液3 U/L 1 号标准品 150l 的 2

4、 号标准品加入 150l 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l,待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品 10l(样品最终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50l,空白孔除外。 7.

5、 温育:操作同 3。8. 洗涤:操作同 5。9. 显色:每孔先加入显色剂 A50l,再加入显色剂 B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液 50l,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数

6、,即为样品的实际浓度。 注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n5) 。5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1试剂盒保存:;2-8。2有效期:6 个月

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