HIV抗体免疫印迹试验不确定结果.doc

1、 HIV 抗体免疫印迹试验不确定结果的血清学特征及病毒载量辅助诊断的意义研究缪礼锋，沈月兰，吴建军，程晓莉，苏斌（安徽省疾病预防控制中心，合肥 230601）【摘要】 目的 研究 HIV 抗体蛋白印迹试验不确定标本的血清学特征，比较血清学和核酸定量方法对不确定结果的鉴别效果，为 HIV 抗体不确定结果的随访处置和诊断提供依据。方法 以安徽省艾滋病确证中心实验室 2003-2014 年确证为“HIV 抗体不确定”并有随访结果的 298例标本为研究对象，对首次和随访标本同时进行蛋白印迹试验和必要的核酸检测，综合两次检测结果和流行病学史资料，来判定标本 HIV 感染的真实状况；检测并记录胶体金快速试

2、验结果、ELISA 的 S/CO 比值、 WB 带型特征（强度）和病毒载量值，结合流行病学资料将不同方法结果进行比较和验证。结果 （1）298 例 HIV 抗体不确定病例中共有 19 种带型，其中最常见三种：p24（48.0%） 、gp160（24.2%） 、gp160 p24（12.4%） 。 (2)298 例不确定标本中发现 28 例病毒感染者，其中血清阳转 24 例，带型不进展但核酸持续阳性者 4 例。 （3）不确定标本中 270 例真阴性标本和 28 例真阳性标本 S/CO 值均值有显著性差异；蛋白印迹试验条带强度越强阳性比例越高，所有 gp160 gp120 带型后续随访全部为 HI

3、V 病毒感染者；胶体金检测不确定标本的敏感性和特异性分别为 96.4%和 88.5%。 （4）病毒载量检测不确定标本的敏感性和特异性分别为 96.4%和 99.6%，假阳性和假阴性结果各 1 例，随访病毒载量检测敏感性和特异性均达 100%。 结论 （1）根据抗体筛查检测结果和确证带型特征与强度，可以对不确定结果进行初步评估；（2）不确定病例中关键带型反应强度越大，感染的风险越高；针对 env 带的不确定标本预示有较大的感染风险，尤其是 gp160 gp120 和 gp160 p24 两种带型，须做进一步的随访和鉴别诊断；（3）不确定结果随访 8 周以上带型不进展也不能完全排除为阴性，应当视情

4、况使用其他方法进行鉴别诊断。 （4）病毒载量检测是鉴别不确定标本的有效方法，当缺少流行病学资料支持时，也要警惕假阳性和假阴性结果的可能。【关键词】艾滋病病毒；不确定结果；蛋白印迹；确证；病毒载量 Study on the indeterminate results of serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and The significance of diagnosis by HIV-1 plasma viral loads. MIAO Lifeng，SHEN Yuelan,，WU Jianju

5、n，et al.(Anhui Provincial Center for Disease Control and Prevention，Hefei 230601，Anhui,China)Abstract: Objective To study the serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and to compare the results of serological and nucleic acid quantitative methods for the identification of t

6、he results of the indeterminate results, providing the basis for the follow-up treatment and diagnosis of HIV antibody. Methods both of the first time and follow up samples of the 298 subjects who were confirmed as indeterminate HIV antibody in Anhui provincial Center of HIV Confirmation Laboratory

7、from 2003 to 2014, were collectedthe results of Western blot test and nucleic acid detection were performed to determine the true state of HIV infection, and to detect and record the fast test results, S/CO value of ELISA, WB bands patterns (intensity) and viral load value, and the results were comp

8、ared and verified by epidemiological data Results (1) there were 19 types of in 298 cases of HIV, three of which were the most common: p24 (48%), gp160 (24.2%), p24 gp160 (12.4%). (2) 28 cases of viral infection were found in 298 cases, including 24 cases with positive serum and 4 cases with positiv

9、e nucleic acid. (3) there were significant differences in the mean value of S/CO in 270 cases of true negative and 28 cases of true positive. With the increase of the intensity of the WB reaction, the positive rate was also increased. All the subjects of gp120 gp160 bands followed up for HIV virus i

10、nfection; the sensitivity and specificity of fast test were 96.4% and 88.5%,.(4) the sensitivity and specificity of viral load test were 96.4% and 99.6%, and the sensitivity and specificity of the The second viral load test were 100%. Conclusions (1) according to the results of antibody screening te

11、st and the characteristics and intensity of Western blot bands, we can make a preliminary assessment of the results. (2) The greater the intensity of the critical bands in the case, the higher the risk of infectionEnv indeterminant were with the greater predictive value of HIV infectionespecially th

12、e gpl60p24 and gpl60 gp120Need to do follow-up and differential diagnosis.(3)the patients with no progress bands in the follow-up for more than 8 weeks could not be directly diagnosed as negative. Other methods should be considered for differential diagnosis.(4) Viral load assay can be applied to di

13、scriminate HIV antibody indeterminant, and when the lack of epidemiological data supports, it should be alert to the possibility of false positive and false negative results.Keywords HIV; indeterminate result; Western blot; confirmation; viral loadHIV 血清学抗体检测是艾滋病实验室诊断的最常用方法，它分为筛查试验和确证试验两个步骤，筛查检测目前常用

14、的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA） 、快速检测法（RT）和化学发光或免疫荧光法，确证试验一般常用免疫印迹法（WB） 。根据卫生部发布的行业标准 1规定：成人和大于 18 月龄的儿童或青少年 HIV 抗体确证试验阳性即可诊断，确证试验可做出 HIV 抗体阳性、阴性和不确定三种结果, 行标建议不确定结果三个月后再次进行检测。而全国艾滋病检测技术规范 （2009 版）将随访时间进一步缩短为 4 周，规定：HIV 抗体不确定结果可以结合流行病学资料，在 4 周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访

15、到 8 周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足 HIV 抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。为此本研究就安徽省十年来不确定标本的血清学特征和核酸鉴别诊断结果做了相应的比较分析和探讨。1 材料与方法1.1 研究对象 收集 2003 年 1 月到 2014 年 9 月送往安徽省 HIV 确证中心实验室初次确证试验为 HIV 抗体不确定的 298 份标本，且所有病例均有随访采样。1.2 检测试剂 人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法，韩国SD 批号：023468B） ；人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（双抗原夹心ELISA法，珠海丽珠，批号：201405

16、1212） ，使用仪器为Authos 2010酶标仪和Authos fluido 洗板机,由奥地利AuthosLabtec Instruments公司生产；人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法，新加坡MP生物医学亚太私人有限公司，批号：AE4008)，使用仪器为ProfiBlot 48自动蛋白免疫印迹仪，由奥地利TECAN公司生产；HIV病毒载量检测为NucliSens EasyQ试剂（HIV RNA定量，法国生物梅里埃,批号：285033） ，使用核酸定量检测仪NucliSens EasyQ Analyzer，最低检测限为50IU/ml,以上试剂均按照试剂盒说明书要

17、求操作并判读结果。1.3 实验方法 检测并记录快速试验结果、ELISA 反应的 S/CO 比值、蛋白印迹试验的带型，同时对蛋白印迹试验的带型强度进行评分，根据艾滋病和艾滋病病毒诊断标准（WS293-2008 ）和全国艾滋病检测技术规范 （2009 版）的规定，WB 确证试验结果阳性判断中最为关键的四条带型分别是 gp160、gp120、gp41 和 p24，因此本研究以阳性对照为标准，对四条关键带型进行评分，评分规则：以试剂盒中自带的强阳性和弱阳性对照作为 WB 条带反应强度的判定标准分别代表 4 分(强阳性)和 2 分(弱阳性)，据此将样本的 WB 条带反应强度得分由低到高依次分为 0 分(

18、阴性)、1 分(强于阴性，但弱于弱阳性)、2 分(弱阳性相当)、3 分(强于弱阳性，但弱于强阳性)、4 分(强阳性相当)，由 2 名以上检测人员肉眼观察每个样本各条带的反应强度，观察结果的平均值计算得分；组合条带得分是所属区内各条带反应强度得分之和。对随访期间带型或强度有进展（或变化）的病例标本进行病毒载量检测，随访期间带型不进展的标本进行集合核酸检测，样品采用三级集合策略，25份血浆标本混合形成一份一级集合样品：每份样品取210l，移入标记二级集合的去RNA酶的离心管中；再从5个二级集合管中分别吸取210l样品，移入标记一集集合的去RNA酶的离心管中。对每份一级集合样品分别进行核酸检测，若为

19、阴性则终止筛查；若为阳性则进行拆分检测，直至确定阳性样品。2 结果2.1. 不确定结果的人口社会学基本特征主要人群有学生、干部、军人、普通职员等无偿献血员和其他受检人员；297 例中男性159 人，女性 137 人，不详 2 人，男女性别比为 1.16:1，年龄分布中最小的 5 岁，最大的 82岁，年龄组分布以 15-44 岁之间最多，其中 15-24 岁、25-34 岁、35-44 岁和大于 45 岁年龄段分别有 92 例（30.9%） 、65 例（21.8%） 、53 例（17.8%）和 54 例（18.1%） ；职业以农民或农民工（21.8%）和学生（19.8%）居多；样本来源以无偿献血

20、员最多，有 126 例，占42.3%。具体见表 1。表 1 不确定标本人口社会学特征Table 1 Demographic and sociological characteristics of the indeterminate specimens人群特征characteristics例数case构成比（ %）proportion性别 Sex男 Male 159 53.36女 Female 137 45.97不详 Unknown 2 0.67年龄 Age14 4 1.3415-24 92 30.8725-34 65 21.8135-44 53 17.7945 54 18.12不详 Unkno

21、wn 30 10.07职业 Occupation学生 student 59 19.80工人 worker 29 9.73农民或农民工 Farmers or migrant workers 65 21.81个体户 Self-employed person 6 2.01司机 Driver 2 0.67公务人员或职员 Official or employee 30 10.07医务人员 Medical personnel 5 1.68娱乐场所服务人员 Entertainment service personnel 3 1.01无业 Unemployed persons 20 6.71不详 Unknow

22、n 79 26.51样本来源 Sample source无偿献血员 Voluntary blood donors 126 42.28有偿供血（浆）者 Paid blood donors 31 10.40羁押人员 Prisoner 13 4.36咨询检测 Counseling and testing 13 4.36术前检测或体检者 Preoperative examination or physical examination 15 5.03其他就诊者 Other clinic 41 13.76孕产妇 Pregnant women 6 2.01吸毒者 drugger 2 0.67男男同性恋者 M

23、an sexy with man 11 3.69感染者配偶或子女 Spouse or child of infected persons 6 2.01不详 Unknown 34 11.412.2 不确定结果的带型特征和强度：在 298 例不确定标本中有 19 种不同的反应带型，最多的是 p24,有 143 例，占 48.0%，其次是 gp160,有 72 例，占 24.2%，gp160 p24 也有 37 例，占12.4%这三种带型占总不确定标本比例达到 84.6%，是本研究中常见的不确定带型。从不确定标本的带型反应强度来看，1 分有 199 例，占 66.8%，2 分有 46 例，占 15.

24、4%，两者合计占 82.2%。不确定标本的带型构成和不同带型反应强度百分比见表 2。其中“”表示带型反应强度非常弱，两人判读结果不一致。 表 2 HIV 抗体不确定标本的带型构成及不同带型反应强度百分比Table 2 the proportion of indeterminate results and the percentage of the reactive intensity反应强度(gp160/gp120/gp41/p24)1 分 2 分 3 分 4 分 5 分及以上带型pattern of Bands例数case构成比（%）prop-ortion例数case百分比（%）prop-o

25、rtion例数case百分比（%）prop-ortion例数case百分比（%）prop-ortion例数case百分比（%）prop-ortion例数case百分比（%）prop-ortiongp160 72 24.2 71 98.6 1 1.4 0 0.0 0 0.0 0 0.0 gp160() gp120 p24 1 0.3 0 0.0 0 0.0 1 100.0 0 0.0 0 0.0 gp160 gp120 p66 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1 100.0 gp160 p24 37 12.4 0 0.0 27 73.0 5 13.5 4 10.8 1

26、 2.7 gp160 p24 p17 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1 100.0 0 0.0 gp160 p31 p24 1 0.3 0 0.0 1 100.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 gp160 gp120() p24 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1 100.0 gp160() gp41() p24 1 0.3 0 0.0 0 0.0 1 100.0 0.0 0 0.0 gp160 p66 p51 p24 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1 100.0 0 0.0 gp160 gp120 6 2.0 0 0.0

27、2 33.3 2 33.3 1 16.7 1 16.7 gp160 p17 3 1.0 3 100.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p31 p17 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p17 17 5.7 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p24 143 48.0 126 88.1 13 9.1 4 2.8 0 0.0 0 0.0 p24 p17 8 2.7 6 75.0 2 25.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p66 p51 p24 1 0.3 1 100.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0

28、0.0 p55 p51 p24 1 0.3 1 100.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p31 1 0.3 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p55 p24 1 0.3 1 100.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 合计 Total 298 100 199 66.8 46 15.4 13 4.4 7 2.35 4 1.42.3 不确定标本的随访进展结果 对 298 例不确定样本进行随访，随访时间一到三个月不等，随访检测阴性即判定为真阴性，随访期间带型阳转判定为阳性，将随访带型仍然不确定的首次和随访标本分别进行核酸定量检测，共发现真

29、阳性标本共计 28 例，占比 9.4%。总体来看，不确定标本随着反应强度的增加其阳性率不断提高。不确定标本在不同反应强度下的阳性率比较见表 3。 表 3:不确定标本在不同反应强度下的阳性率比较Table 3: positive rate of indeterminate results with different reaction intensity反应强度(以 gp160/gp120/gp41/p24 四条带计算)1 分 2 分 3 分 4 分 5 分及以上带型pattern of Bands例数Case例数（阳性数）Case(po-sitive)阳性率（%）rate例数（阳性数）Case

30、(positi-ve)阳性率（%）rate例数（阳性数）Case(posit-ive)阳性率（%）rate例数（阳性数）Case(posit-ive)阳性率（%）rate例数（阳性数）Case(posi-tive)阳性率（%）rategp160 72 71(2) 2.8 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 gp160() gp120 p24 1 0 0.0 0 0.0 1（1） 100.0 0 0.0 0 0.0 gp160 gp120 p66 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1(1) 100.0 gp160 p24 37 0 0.0 27(6) 22.2

31、 5(3) 60.0 4(3) 75.0 1(1) 100.0 gp160 p24 p17 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1(1) 100.0 0 0.0 gp160 p31 p24 1 0 0.0 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 gp160 gp120() p24 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1(1) 100.0 gp160() gp41() p24 1 0 0.0 0 0.0 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 gp160 p66 p51 p24 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1（0） 0 0.0 gp160 gp120 6 0

32、0.0 2（2） 100.0 2（2） 100.0 1（1） 100.0 1（1） 100.0 gp160 p17 3 3（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p31 p17 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p17 17 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p24 143 126(2) 2.4 13(1) 7.7 4（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 p24 p17 8 6（0） 0.0 2（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p66 p51 p24 1 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0

33、 0 0.0 0 0.0 p55 p51 p24 1 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p31 1 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 p55 p24 1 1（0） 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 0 0.0 合计 Total 298199（4） 2.0 46（9） 19.6 13（6） 46.2 7（5） 71.4 4（4） 100.0 备注：“（） ”内为“阳性例数” ，此处“阳性”指不确定标本随访后带型进展可以判定为阳性或两次病毒载量检测均为阳性。从 298 例标本中带型出现频次来看，p24 和 gp160 出现频次最高

34、。p24 条带出现 197 次，其中 19 次随访阳性，占 9.6%，gp160 出现 125 次，其中 25 例随访阳性，占 20%，gp120 仅出现 9 次，且随访 100%皆为阳性；从组合带型来分析，gp160 p24 和 gp160 gp120 两种带型是随访阳性率最高的带型。不同带型出现频次和阳性率比较见表 4。表 4 不同带型出现频次和阳性率一览Table 4 the frequency and positive rate of the bands 基因组Genome带型bands频次frequency阳性例（ %）Positive（rate）占总阳性例数百分（% ）propor

35、tionenv gp160 125 25(20.0) /gp120 9 9(100.0) /gp41 1 0(0.0) /gag p17 30 1(3.3) /p24 197 19（9.6） /p55 2 0（0.0） /pol p66 3 1（33.3） /p51 3 0（0.0） /p31 3 0（0.0） /组合带型 Combinations of bands gp160 722（2.8） 6.9gp160() gp120 p24 1 1（100.0） 3.4gp160 gp120 p66 1 1（100.0） 3.4gp160 p24 37 13（35.1） 44.8gp160 p24

36、 p17 1 1（100.0） 3.4gp160 gp120() p24 1 1（100.0） 3.4gp160 gp120 6 6（100.0） 20.7p24 143 3（2.1） 10.3其他带型 36 0（0.0） 0合计 298 28（9.4） 100.02.4 不同实验方法检测不确定标本的结果比较 298 份不确定标本 ELISA 试验，其中假阳性（270 份）标本仅有一例 S/CO 比值为 9.1，其他均小于 6，均值为 2.54；胶体金快速检测不确定标本的敏感度可以达到 96.4%，但特异性仅 88.5%；而病毒载量检测敏感性和特异性分别达到 96.4%和 99.6%。298

37、份不确定标本胶体金快速法检出 28 份阳性。结果具体见表 5表 5 ELISA、胶体金快速方法和病毒载量检测不确定标本的结果比较Table 5 Comparison of the results of ELISA, RT and viral load testing of the indeterminate specimensEILSA S/CO 比值 Value 快速(fast testing,RT) 病毒载量(首次) viral load(the first)不确定标本indeterminate specimens 最大值Maximum最小值Minimum均值Mean阳性（份）Positi

38、ve阴性（份）Negetive阳性（份） 阴性（份）Positive Positive270 份真阴性 true negetive 9.1 1.04 2.54 31 239 1 26928 份真阳性 true positive 14.4 5.1 8.12 27 1 27 1298 例不确定标本病毒载量检出 29 份核酸阳性，其中 24 例在随访中血清自然阳转；4 例追踪随访 6 个月以上带型不进展，但两次病毒载量检测均为阳性，流行病学史调查（3 例为男男同性恋者，1 例为老年嫖客，且均有高危行为史）支持核酸诊断阳性结果；还有 1 例无偿献血员首次核酸定量为 140cps/ml，随访检测带型消失

39、，且流行病学史调查证实无高危行为史，证实为一例假阳性标本。我们还发现 1 例特殊的血清阳转标本：一位孕妇（239 号标本）初始 EIA 检测为抗体高滴度（S/CO=7.4） ，快速试剂检测阳性，HIV-1 蛋白印记 (WB)实验结果为不确定（带型：gp160/p24，强度：4 分） ，病毒载量检测结果 TND（未检出） ，四周后随访检测 WB 结果显示带型进展为阳性（gp160 gp120 p24），病毒载量检测结果仍显示为罕见的低拷贝（371 cps/ml） ，六个月后再次随访带型进展为全带型，流行病学史调查该孕妇此前与男男同性恋感染者有性接触史，可以证实首次核酸检测为假阴性结果。不确定标本

40、中 28 例真阳性样本的病毒载量结果和随访带型变化见表 6。表 6 不确定标本中 28 例真阳性样本的病毒载量结果和随访带型变化Table 6 The results of viral load in 28 cases of truepositive specimens and the change of the banding pattern after a followup test.编号No.首次带型banding pattern after the first test病毒载量（cps/ml)Viral load随访带型(间隔时间 1-3 个月)Banding pattern afte

41、r a followup test(Interval 1-3 months)病毒载量（cps/ml)viral load6 个月后随访带型Banding pattern after a 6 months of follow-up 26 p24 11000000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /162 gp160 gp120 770000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /189gp160 ()gp120 p2416000000 gp160 gp1 20 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /236g

42、p160 gp120 p66 110000 gp160 gp120 p66 160000gp160 gp120 p66237 gp160 gp120 24000 gp160 gp120 1800 gp160 gp120239 gp160 p24 TND gp160 gp120 p24 371 全带240 p24 1900 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 110000 /241 gp160 gp120 30000 gp160 gp120 8900 gp160 gp120242 gp160 p24 190000 gp160 gp120 p66 p51 gp

43、41 p31 p24 p17 / /243 gp160 p24 230000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /245 gp160 p24 35000 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p24 p17 / /246gp160 p24 p17 31000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /250gp160 gp120（）p24110000 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 / /253 gp160 p24 120000 gp160 gp120 p66 p51

44、 gp41 p31 p24 / /259 gp160 p24 90000 gp160 p24 370000 gp160 p24260 gp160 58000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /263 gp160 p24 5300000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /266 p24 8600000 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p17 / /267 gp160 p24 400000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /268 gp

45、160 gp120 910000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /270 gp160 p24 30000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /271 gp160 p24 94000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /273 gp160 gp120 19000 gp160 gp120 p66 gp41 p31 p24 / /275 gp160 p24 3500000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /276 gp160 gp120

46、 570 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /277 gp160 p24 3200 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 / /279 gp160 1500000 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p17 / /294 gp160 p24 27000 gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17 / /备注：“/”代表未随访或未检测3 讨论根据艾滋病病毒感染诊断行业标准 1，大于 18 个月龄的儿童或成人两项符合一项即可诊断为 HIV 感染： HIV 抗体

47、确证试验阳性或血液中分离出 HIV 毒株。有急性 HIV 感染综合症或流行病学史，且不同时间两次 HIV 核酸检测结果均为阳性。由于血液分离毒株对实验室条件要求较高，耗时较长一般不被采用，HIV 抗体确证试验作为常用的方法被广泛用于个体诊断，目前国内检测 HIV 抗体最常用的确证方法仍然是蛋白印迹试验（WB） 。根据规范 2对 HIV 抗体确证检测判断标准的规定，同时符合以下 2 条标准可判为 HIV-1抗体阳性：至少有 2 条 env 带（gp41 和 gp160/gp120）出现，或至少 1 条 env 带和 p24 带同时出现；符合试剂盒提供的阳性判定标准。HIV-1 抗体特异带包括：e

48、nv 带：gp160/gp120、gp41；gag 带：p55、p24、p17；pol 带：p66、p51、p31。HIV 抗体不确定是指出现 HIV 抗体特异带，但不足以判定阳性。HIV 抗体阴性是指无 HIV 抗体特异带出现。我们的研究显示，从社会人口学来看，男女性别比并没有明显的差异，年龄组分布 15 岁及以上各年龄组分布比较均匀，从检测人群来看无偿献血员最多，这可能与血液系统筛查检测普遍采取较低的灰区设置有关，国外对献血员和孕妇等一般人群的研究也显示不确定的比例较高，但多数与 HIV 感染无关 3,4。从不确定结果的条带出现频率来看，p24和gp160是出现频率最高的常见带，从带型来分

49、析，p24单带也最为常见，其次是gp160单带，gp160/p24组合带也占一定比例。,我们的研究结果显示单条p24或gp160大部分为非特异性反应的假阳性标本，这和国内外相关报道 3,5,6相似。从国外Schpbach等人 7,8和国家参比室王继宝等 9的研究来看，确证检测的免疫印迹法(WB)带型中蕴含新发感染信息，WB带型的带型和强度与感染时间有高度相关性，据此本研究对不确定按带型强弱进行评分，结果显示随着关键带型（gp160/gp120和p24）强度的增加，不确定结果的阳性预期值显著增加，但与p66、p55、p51、p31和p17带相关度不高。根据MP试剂说明书所述，gp160为gp41的聚合体，且浓度高于gp41,因此可以认为env带（gp160/gp120/gp41）和p24带型的出现可能暗示有更大的感染风险。特别是gp160 gp120和gp160 p24带提示有很大感染风险，必须随访检测，这与鲍作义等人研究 6结果相似。Tomaras GD等人的研究 10显示感染后最早测出得抗体为gp41和p24，gp120抗体比gp41出现平均晚14天；我们的不确定标本最终随访为感染者的