1、鹿骨胶原肽粉的制备工艺研究 摘要：以鹿骨为原料进行脱脂、脱钙，提取鹿骨胶，然后采用酶解法制备鹿骨胶原肽，并对水解物进行超滤，最后测定其抗氧化性质。结果表明：此工艺制备出的鹿骨胶原肽具有较好的抗氧化性，其羟基自由基清除率可达 72.64%， ABTS 自由基清除率可达 91.09%，超氧阴离子自由基清除率可达31.29%，还原力最高可达 0.374，具有极大的应用价值。 关键词：鹿骨胶原肽；评价；制备；纯化 中图分类号： TQ464.7 文献标识码： A DOI 编号： 10.14025/j.c 鹿骨是鹿的骨骼，含有大量胶原蛋白、磷脂质、磷蛋白、维生素，还含有多种矿物质元素。胶原多肽是胶原或明胶
2、经过蛋白酶降解处理得到的产物，与明胶相比具有较强的水溶性，易被人体吸收。胶原多肽具有较多的生理功能，例如抗高血压、预防与治疗骨关节炎和骨质疏松、胃溃疡等疾病、抗衰老和抗氧化等。 1 材料与方法 1.1 原材料 鹿骨，购自长春市双阳区鹿场。 1.2 工艺流程 原料挑选 烘干 粉碎 脱脂 脱钙 去杂蛋白 提取鹿骨胶 酶解 离心 烘干 测定 1.2.1 鹿骨脱脂处理方法 砸碎的骨料经过水洗后，部分脂肪被流水洗掉，残余的脂肪用石油醚脱去。将骨粒在石油醚中浸泡 24 小时。 1.2.2鹿骨脱钙处理方法 称取一定量经粉碎的鹿骨，加入浓度为 4%的盐酸（盐酸体积 骨粒质量为 41 ），每 6 小时换一次盐酸
3、，浸泡数日。 1.2.3 鹿骨去除杂蛋白处理方法 先用 0.2%NaOH 溶液后用 5.0%NaCl 溶液各浸洗脱脂脱钙后的 鹿骨粉 3 小时。进行此处理不仅可以有效去除鹿骨中的非胶原蛋白，同时 NaOH 还可以与鹿骨中的脂肪发生皂化反应，进一步去掉部分油脂，更加有利于胶原蛋白的提取。 1.2.4 鹿骨胶的提取 称取脱钙骨，利用水提法在 95 下提取 3 4 小时。提取后 5000 转 /分钟离心 30 分钟，将提取液冷冻干燥。 1.3 酶解制备鹿骨胶原肽 取鹿骨胶加入蒸馏水配成一定底物浓度的溶液， 90 下水浴 10分钟，破坏蛋白结构。冷却后用 2 摩尔 /升 NaOH 调节 pH，加入碱性
4、蛋白酶，在酶解过程中用电位滴定计滴加碱液维持 溶液 pH 值恒定。酶解一段时间后，溶液经 90 灭酶 20分钟 ，冷却至室温，用 0.5摩尔 /升 HCl溶液调节 pH 至 7.0，5000 转 /分钟离心 10 分钟取上清液，冷冻干燥后得到鹿骨胶原肽。 1.4 鹿骨胶原肽的分离纯化 将得到的鹿骨胶原肽粗提物，溶于蒸馏水中配成 2毫克 /毫升的溶液，分别使用膜孔径 10000NMWC 和 3000NMWC 的中空纤维素柱，把粗提物按分子量的大小分成 3 种组分，收集后冷冻干燥成粉。 1.5 抗氧化性质的测定 1.5.1 羟基自由基清除能力的测定 参照 Amarowicz 的方法。 1.5.2
5、ABTS 自由基清除能力的测定 参照 Kong 的方法 。 1.5.3 超氧阴离子自由基清除能力的测定 参照 Li 的方法 。 1.5.4 还原能力的测定 参照 Lin 的方法。 2 结果与分析 为了比较超滤得到的 3 种组分的抗氧化活性，我们将 3 种组分冻干后，配成 12毫克 /毫升的溶液，在等浓度下测定其抗氧化活性。由于 3种组分对ABTS自由基清除效果良好，在 12毫克 /毫升时，都达到 100%，所以改为在 4毫克 /毫升条件下测定。综合考虑，我们认为组分 A2的抗氧化活性高于其他两个组分（见表 1）。 表 1 超滤组分抗氧化活性 参考文献 王晨 .牛骨胶原多肽的制备及清除自由基活性
6、研究 D.广州：华南理工大学， 2010. AMAROWICZ R， NACZK M， SHAHIDI F.Antioxidant activity of various fractions of non-tannin phenolics of canola hulls ）： 2755-2759. KONG B， XIONG Y L. Antioxidant activity of zein hydrolysates in a liposome system and the possible mode of action ）： 6059-6068. LI Y， JIANG B， ZHANG T， et al.Antioxidant and freeradical -scavenging activities of chickpea protein hydrolysate （ CPH） IN Y， LIU M， et al. Research on the preparation of antioxidant peptides derived from egg white with assisting of high-intensity pulsed electric field 作者简介：刘春雷，长春科技学院，讲师，在读博士生，研究方向：农产品加工与贮藏工程。
