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米氏常数测定方法.doc

酶活米氏常数实验一、实验前准备 1、24孔板洗净烘干,准备足够枪头。 2、准备催化剂,在光下呈透明状为分散性较好,否则用超声清洗器(位于化学间)超声分散5min,期间准备底物(如TMB或者ABTS),浓度依照自己实验的要求定(10mg/mL或5mg/mL),一般1mL足够用,可在1.5mL离心管中溶解。TMB(外间冰箱上层)溶于DMSO(二甲亚砜,位于化学间王春雨的柜子里),ABTS(与TMB放在一起)溶于二次水。3、将缓冲液、催化剂、底物、H2O2、200L和10L移液枪、50L排枪(位于称量处上方模拟酶专用枪的柜中)、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中,放到对面酶标仪前,开空调定室温(25,提醒其他人随手关门),24孔板中其中一排加入适量H2O2(每孔1mL左右,注意避光,可在板上盖一张卷纸),将缓冲液、催化剂、底物放实验台上,静置0.5-1h。4、记录本上提前写好实验的加样顺序: 催化底物TMB(或ABTS)的酶促动力学过程加样顺序:200L缓冲液 10L催化剂 底物TMB(ABTS)(0,0.5,1,2,4,6,8,10

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