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实验三 质粒DNA的提取鉴定一、原理质粒是细胞质中独立于染色体之外的能自主复制的遗传单位。基因工程中的质粒一般是指细菌质粒,它可以随着细菌的细胞分裂将自己的遗传特性稳定的遗传给后代细胞。广义的质粒还包括霉菌、蓝藻和酵母质粒以及动植物细胞中的线粒体和质体等。细菌质粒是环状双链DNA分子,其他少数质粒是线性DNA分子,而酵母的杀伤质粒则是RNA。环状质粒的DNA分子具有超螺旋性质,长度可以从1kb到200kb左右不等。质粒中除了复制、转录等相关的必需序列外,有一些DNA区段对于细菌来说并非必需序列,通过体外操作以目的基因取代这些非必需区段,这种改造的质粒就成为外源基因载体。按照质粒载体的用途和其外源DNA的遗传信息能否表达可分为中间克隆载体(如pMD18-T)和表达载体(如pET-X、pBI121等)。克隆载体所连接的的DNA片段一般没有启动子,因而不能转录,主要用于目的片段的大量制备。表达载体按照宿主的不同有各种各样的原核表达载体(如大肠杆菌)和真核表达载体(如酵母、动物和植物),目的基因在载体上有完整的启动子和终止子调控,可以在宿主细胞中转录并翻译成蛋白。根据质粒
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