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质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定实验报告.doc

质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定一、实验目的1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒DNA的方法;2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定的方法;3.学习并掌握紫外吸收检测DNA浓度和纯度的原理和方法;4.学习并掌握PCR基因扩增的实验原理和操作方法;5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用方法。二、实验原理1.PCR(多聚酶链式反应) 在DNA聚合酶催化下,可以DNA为模板,以特定引物为延伸起点,以dNTP为原料,通过变性、退火、延伸等步骤, 在体外(缓冲液中)复制DNA,使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。 PCR一次循环的具体反应步骤为:A.变性:加热反应系统至95,使模板DNA在高温下完全变性,双链解链 。 B.退火:逐渐降低溶液温度,使合成引物在低温(3570,一般低于模板Tm值的5左右),与模板DNA互补退火形成部分双链。 C.延伸:溶液反应温度升至中温72,在 Taq酶作用下,以dNTP为原料,引物为复制起点,模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。 2.质粒DNA的提取与制备(1)

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