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家兔关节软骨细胞的分离与培养.doc

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家兔关节软骨细胞的分离与培养.doc

家兔关节软骨细胞的分离与培养实验动物 3周龄新西兰大白兔实验试剂胎牛血清, 胰蛋白酶, II型胶原酶, 台盼蓝, DMEM培养基, 甲苯胺蓝染色剂主要试剂配制方法1.0.01mol/L PH7.2一7.4PBSNaCI 8.0克KCI 0.2克KH2PO3 0.2克Na2HPO312H2O 2.08克精确称量上述药品并充分溶解于1000mL三蒸水中，用1mol/L HCI和1mol/L NaOH溶液调整pH值至7.2一7.4。2.DMEM培养液将DMEM干粉一包溶于1O00mL三蒸水中，按说明书加入NaHCO3，并加入双抗(终浓度为:青霉素100U/mL，链霉素100U/mL)和维生素C(终浓度为:50mg/L)，调节PH到7.0一7.2，超净工作台内过滤除菌。置一200C冰箱保存备用。如需含血清的培养基，于使用前加入足量56水浴灭活30分钟的胎牛血清(FCS)。.1.3主要实验仪器倒置显微镜, 数码照相机, 二氧化碳培养箱(2300型)