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碱变性法小量提取质粒,DNA的限制性酶切厦门大学医学院分子生物学实验教学组实验目的v 掌握碱变性法提取质粒DNA的方法。v 掌握质粒酶切鉴定原理, 学会根据目的基因和实验目的选择合适载体与限制性内切酶,设计构建体外重组分子。质粒(plasmid)v是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)和细菌细胞中染色体以外的DNA分子,在基因工程中质粒常被用做基因的载体。 是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)和细菌细胞中染色体以外的DNA分子,在基因工程中质粒常被用做基因的载体。分离质粒DNA的 基本步骤v培养细菌使质粒扩增;v收集和裂解细菌;v分离和纯化质粒DNA 质粒DNA的提取方法v碱变性法(碱裂解法);v煮沸裂解法;v羟基磷灰石柱层析法;v质粒DNA释放法;v酸酚法等。 碱变性(裂解)法基本原理: 在碱性条件下(pH 12.6),染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,质粒DNA氢键也大部分断裂,双螺旋也有部分解开,但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH 4.8的乙酸钠将其pH调到中性
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