1、标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。2 范围微生物实验室保存的标准菌株。3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。4 术语和定义4.1 标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。4.2 标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。4.5 质控菌株ATCC 最佳，但当无法获得时可以使用 ATCC 演化的
2、菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。5 保存程序5.1 标准菌株5.1.1 商业购买的 ATCC 标准菌株干粉，-80低温保存，可以 2 年以上。安瓿真空包装的，-80可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。5.1.2 复苏用 1ml 无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养 18-24h。酵母菌要求 3 天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2 标准储备菌株5.2.1 由复苏后的 ATCC 标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮取培养物上的菌
3、体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株，可用 1-2 年。一年 52 周需要 52 支以上。5.2.2 甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于 20%的甘油。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80保存。除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限1-5 年。5.2.3 全血保存法成分为脱纤维羊血。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限 1-5 年。5.2.4 标准储备菌株
4、进行编号和登记。5.3 工作标准菌株由标准储备菌株传代得到的菌株。标准储备菌株对多向下传三代。过多的传种会增加变异的机会。标准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养 18-24h 即工作标准菌株。储存在 2-8，可放四周。个别营养要求高的为 2 周，例如肺炎链球菌和嗜血杆菌。使用时应编号并登记。5.4 编号方法每个菌的保存管都要有唯一的编号，签字笔标注，便于查找和管理。来源 数字 意义购买的标准菌株 1501ATCC25922 15 年第 1 株 ATCC25922储备标准菌株 1501ATCC25922-3 由 1501ATCC25922 传代而来的 3 号标准储备菌株5.5
5、 记录管理5.5.1 菌种应有严格的登记。每个编号都要有详细的记录包括来源、传代、保存方法、使用记录、使用原因、高压灭菌记录等。附表标准菌株记录表 标准储备菌株记录表5.5.2 菌种保管应有专人负责，保存于专用冰箱中，双人双锁，确保菌种安全。保管人员变动时，必须严格交接手续。5.5.3 各种菌种应按规定时间接种，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换5.5.4 一个使用周期结束后，标准菌株、储备菌株、工作菌株都要进行高压灭菌处理，并做好记录。6 使用流程购买的标准菌株，编号，-80保存复苏接种合适的培养基，孵育出菌落挑取典型的菌落到合适的稳定剂中，编号，-80保存，准备 n 支性能验
6、证标准菌株标准储备菌株每周取出一支标准储备菌株传种合适的培养基，适宜条件孵育出菌落传代培养物日质控 周质控 月质控每周取出一支标准储备菌株传种合适的培养基，适宜条件孵育出菌落每月取出一支标准储备菌株传种合适的培养基，适宜条件孵育出菌落储备菌株管用完第二天高压灭菌用完第二天高压灭菌传代培养物可以作为第一天的工作菌株使用。4保存。以后 6 天用。以后的 6 天每天都用传代培养物传一个新的菌株，作为工作菌株使用。工作菌株使用后第二天高压灭菌7 天后传代培养物作废，进行高压灭菌重新取一直标准储备菌株传种，进入下一轮周期，程序如上面几个步骤直接作为工作菌株使用，第二天高压灭菌也可以用最后一天的的工作菌株
7、作为传代培养物继续使用一周。0 代 1 代2 代7 质量控制7.1 观察菌落的典型形态是否符合菌种。有没有杂菌生长。7.2 用氧化酶、触酶、上机等生化试验，鉴定菌种有没有变化。7.3 如果有污染或怀疑有问题时，应准备新的首次传代物或者获取新的标准菌株。8 参考文献序号 唯一性编号 文献名称9.1 ISBN978-7-117-19862-2/R19863 全国临床检验操作规程第四版购买的标准菌株（可追溯来源，卫生部室间质评菌株可作为质控菌株使用，按照标准菌株管理）接种传代培养一次，并进行纯度和生化鉴定作为“储存标准菌株”进行多个分装保存，按照特定条件储存和推荐的储存时间进行纯度检查和生化鉴定。作为传代物或者第一支“工作菌株”特定的储存条件和推荐储存时间室内质控每天传代平板作为第二天的工作标准菌株，进行室内质控，用完立刻高压处理可以再重复一周，规则同上。但一般来说工作菌株不能超过 3 代9.2 ISBN978-7-5478-1226-6/R395 临床微生物学诊断与图解第三版9.3 GBT 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测9.4 SNT 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程9.5 WST232-2002 商业微生物培养基质量检测规程
