1、 化学发光免疫技术第一节 发光与化学发光剂第二节 发光酶免疫测定 （ CLEIA）（ chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术 (CLIA)（ chemiluminescence immunoassay） 第四章 电化学发光免疫测定技术 (ECLI)(electrochemiluminescence immunoassay) 化学发光免疫技术： 集灵敏的化学发光分析和特异的抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。概 念 特点：特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。化学发光免疫技术的类型 按 发光 剂 不同分
2、为1.发光酶免疫测定 （ CLEIA）chemiluminescence enzymeimmunoasssay 2.化学发光免疫测定技术 (CLIA)chemiluminescence immunoassay 3.电化学发光免疫测定技术 (ECLI)electrochemiluminescence immunoassay 按分离方法不同分1.微粒子化学发光免疫测定2.磁颗粒化学发光免疫测定第一节 发光与化学发光剂一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射。1.光照发光 :发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。2.生物发光 :反应底
3、物在荧光素酶的催化下利用 ATP产能，生成激发态的氧化荧光素 ， 后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出。3.化学发光 :在常温下由化学反应产生的光的发射。化学发光是一个多步骤的过程。荧光素酶ATP； O2； Mg2+氧化萤火虫荧光素萤火虫荧光素返回返回光 + AMP+ O2 + CO2 +化学发光 机制： 某些化合物可以利用化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 化学发光剂或发光底物： 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物。 发光剂分为 荧光素、生物发光剂、化
4、学发光剂 能参与化学发光反应； 与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物试剂； 偶联后仍保留高的量子效应和反应动力； 应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。化学发光剂应符合以下几个条件返回返回1.酶促反应的发光底物 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物。 CLEIA中常用的酶有 HRP和 AP HRP的发光底物有鲁米诺、对 -羟基苯乙酸 AP的发光底物有 AMPPD、 4-MUP（ 荧光底物） 特点：可作标记物、也可作过氧化物酶的底物1.1 鲁米诺H2O2 /OH HRP+N2 + H2O +光对 -羟基苯乙酸（ HPA） HPA在 H2O2存在下被 HRP氧化成氧化二聚体（荧光物质），在 350nm激发光作用下，发出 450nm波长的荧光，可用荧光光度计测量。 1.2 HPAH2O2HRP+荧光氧化二聚体AMPPD AMPPD在碱性条件下，被 AP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有 2 30min的分解半衰期，发出波长为 470nm的持续性光，在 15min时其强度达到高峰， 15 60min内光强度保持相对稳定。 光AP /OH HPO4 21.3 AMPPD
