外显子的捕捉与鉴定、实验目的通过本实验了解外显子捕捉的实验原理,掌握外显子捕捉和采用DNA探针检测特定DNA片段的遗传分析方法。二、实验原理1. 真核生物的基因结构不同于原核生物,真核生物基因的编码序列是不连贯的,即在两个编码序列之间有一段不编码蛋白质的非编码序列。编码序列称为外显子(exon),非编码序列称为内含子(intron)。两个外显子之间插入了一个内含子。外显子是出现在mRNA分子中的基因序列;内含子则是不出现在mRNA分子中的基因序列。2. 外显子捕捉“外显子捕捉(exontrapping)”曾称exonamplification,是从基因组克隆片段中分离可表达序列的技术之一,在“人类基因组计划”中得到了广泛的应用,是通过构建一种载体,从其插入片段中识别和回收外显子序列的实验方法。捕捉外显子的载体pETV-SD是一种反转录病毒穿梭载体(shuttlevector),即其可在不同种的生物中如大肠杆菌和酵母中,细菌和哺乳动物细胞中进行复制的载体。因为凡是含有内含子和外显子的基因在转录后都要经过RNA剪接,这就需要有剪接供体(splicin