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基因克隆简介1一.DNA分子克隆的基本原理v 基因克隆(genecloning)或分子克隆,又称为重组技术,是应用酶学方法,在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子,并使之在适当的宿主细胞中进行扩增,形成大量的子代DNA分子的过程。v 克隆(clone)一指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程(cloning)。2一个完整的基因克隆过程包括以下步骤v .获得待克隆的DNA片段(基因);.目的基因与载体在体外连接;.重组DNA分子导入宿主细胞;.筛选、鉴定阳性重组子;.重组子的扩增与或表达。3 1.从生物有机体基因组中,分离出带有目的基因的DNA片段。 2.将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上,形成重组DNA分子。 3.将重组DNA分子转移到适当的受体细胞(亦称寄主细胞)并与之一起增殖。 4.从大量的细胞繁殖群体中,筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞,并筛选出已经得到扩增的目的基因。 5.将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞,使之在新的遗传背景下实现功能表达,产生出人
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