第五章 植物细胞培养及次生代谢产物生产第一节 悬浮培养愈伤组织的诱导和悬浮细胞系的建立Cell suspension culture:将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。愈伤组织诱导和培养条件优化1、愈伤诱导(紫草为例)先获得无菌苗 外植体诱导愈伤 注意:2,4D的合理使用2、培养条件优化 在系列单因子比较试验基础上,获得最合适的培养条件组合。悬浮细胞系的建立成功的悬浮细胞系:1、悬浮培养物分散性良好,细胞团较小。2、均一性好:细胞形状和细胞团大小大致相同。3、生长迅速几个重要的生长、生产衡量指标绝对生长速率:Ra=(w2-w1)/(tv),w2、w1分别为培养物的最终和起始干重(g),t为培养时间(d),v为培养基体积(L)。产物含量干重产物含量干重表示:产物占愈伤组织干重的百分比。产物产量产物产量:每升培养基生产的产物量(mg)。悬浮培养细胞的同步化悬浮培养细胞的同步化1、分选法、分选法 梯度离心;梯度离心;Ficoll;流式细胞仪;流式细胞仪2、饥饿法、饥饿法3、抑制剂法、抑制剂法 FdU,HU4、低温处理、低温处理低温处理抑制细胞分裂,再把温度提高到正常的