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核酸的分离纯化和鉴定l核酸包括DNA、RNA,在细胞中都与蛋白质结合而存在。l分离纯化核酸总的原则:1、保证一级结构的完整性,完整的一级结构是研究核酸 结构和功能的基础;减少化学、物理、生物因素对核酸的降解:l 避免过酸、过碱对磷酸二酯键的破坏;l 避免机械剪切力以及高温煮沸;l 抑制DNase或RNase的活性;2、排除蛋白质、脂类、糖类等分子的污染。真核DNA提取的主要步骤 真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都可以用来制备基因组DNA。l温和裂解细胞,溶解DNA,使DNA与组蛋白分离;l采用化学或酶学方法去除蛋白质、RNA及其他大分子。外周血白细胞DNA的提取(NaI法)原理 利用双蒸水低渗溶胀红细胞及白细胞膜,释放出血利用双蒸水低渗溶胀红细胞及白细胞膜,释放出血红蛋白及细胞核,红蛋白及细胞核,NaINaI破核膜并有效解离破核膜并有效解离DNA-DNA-蛋白质复合蛋白质复合物,使核酸处于易提取状态,物,使核酸处于易提取状态,再以氯仿再以氯仿/异戊醇抽提异戊醇抽提(蛋白质变性沉淀并溶解脂类,异戊醇可减少抽提过程(蛋白质变性沉淀并溶解脂类,异戊醇可减少抽提过程中的泡沫产生),离心后
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