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第五章基因的分离与鉴定1要点课件.ppt

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第五章基因的分离与鉴定1要点课件.ppt

基因的分离与鉴定基因的分离与鉴定n DNA克隆片段的产生和分离n 重组体DNA分子的构建及导入受体细胞n 基因克隆的实验方案n 克隆基因的分离n 重组子的选择与鉴定克隆的概念克隆克隆,是英文Clone 的音译,它是由一个个体经无性繁殖所产生后代的总称，也可以是指用其它方式产生无性繁殖后代的技术。有两个缺一不可的特征：既是无性生殖，又是遗传同质（相同的遗传物质）。一、目的基因的分离一、目的基因的分离1.从生物基因组分离目的基因n利用基因文库筛选目的基因基因组文库、cDNA文库n利用mRNA或cDNA钓取目的基因2.利用基因表达产物来获取目的基因n使用探针从cDNA文库中筛选目的基因3.用酶学或化学方法合成目的基因n逆转录酶法合成目的基因nPCR法合成目的基因n化学合成目的基因胰岛素基因、干扰素基因等市场化二、目的基因的来源1.基因组DNA的非特异性断裂2.染色体DNA的限制性内切酶酶解3.通过mRNA合成cDNA4.人工体外合成DNA片段5.PCR扩增特异性基因片段三、DNA克隆片段分离的方法1.利用限制性内切酶片段化基因组DNA 鸟枪法（shotgun approch）：用限制