HPLC检测甜蜜素含量的研究.doc

1、HPLC 检测甜蜜素含量的研究摘要：目的 研究高效液相色谱法测定甜蜜素含量的方法。方法 因为 GB/T5009.97-2003方法中气相色谱法很容易造成含环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯，造成假阳性，所以，笔者选用 C18色谱柱（4.6mm250 mm，5 m） ，以甲醇-水：（80+20）为流动相，流速 1.0 mL/min，柱温 25，检测波长为 314 nm。结果甜蜜素在 2100 g/ml 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，R2=0.9998，平均加样回收率为 97.04%，RSD=4.1%（n=6） 。结论 本法操作简便，准确，重复性好，精密度高。 关

2、键词：甜蜜素 高效液相色谱法 含量测定 甜蜜素（环已基氨基磺酸钠）是我国广泛使用的甜味剂之一，已应用于食品加工业、农业等各领域。由于过多的食用甜蜜素会对身体造成不良影响，因此在实际使用中应严格控制其添加量。 目前甜蜜素的检测采用的标准是 GB/T 5009.97，该标准适用于食品中甜蜜素的通用检测的方法，但是白酒等类似食品中甜蜜素的检测若是采用此方法会导致某些食品中环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯，而被误认为是环已基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成其中含有甜蜜素的假象，因此通用甜蜜素的检测方法GB/T 5009.97不适用于白酒一类食品含有环己醇及环己基的类似物质中

3、甜蜜素的检测。 本试验采用高效液相色谱（HPLC）法测定食品中甜蜜素的含量。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 岛津系列高效液相色谱仪：LC-20AT 二元泵，SPD-20A 检测器； 1.2 药品 甜蜜素标准品 中国计量科学研究院 ；除甲醇为色谱纯外其余均为分析纯 5%的硫酸 5%的碳酸氢钠 亚铁氰化钾溶液（92g/l）：称取亚铁氰化钾【K4Fe（CN）6?3H2O】106g，用水溶解于 1000ml容量瓶中，定容到刻度后混匀。 乙酸锌溶液（183g/l）：称取乙酸锌【Zn（CH3COO）2?2H2O】219g，加入 32ml乙酸，用水溶解于 1000ml容量瓶中，定容到刻度后混匀。 2 方法与

4、结果 2.1 色谱条件 Hypersil GOLD C18 色谱柱：（4.6 mm250 mm，5 m） ，流动相：甲醇+水（80+20） ，流速：1.0 mL/min，柱温：25 ，检测波长为：314 nm，进样量为：20L。 2.3 溶液的制备 2.3.1 甜蜜素标准储备液的制备 1000ug/ml 甜蜜素标准储备液：精确称取 100.0mg甜蜜素标准品，用水定容至 100ml，配成浓度为 1000ug/ml甜蜜素标准储备液 2.3.2 甜蜜素标准系列的配制 从 1000ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取 2、5、10ml 溶液，分别定容至 100ml，配成 20、50、100ug/ml

5、 的甜蜜素的标准溶液。从100ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取 5、10ml 溶液，分别定容至100ml，配成 5、10ug/ml 的甜蜜素的标准溶液。从 20ug/ml甜蜜素标准储备液中准确吸取 10ml溶液，分别定容至 100ml，配成 2ug/ml的甜蜜素的标准溶液。 2.4 样品的处理 2.4.1 标液的处理 分别准确吸取 10ml浓度为 2、5、20、50、100ug/ml 的甜蜜素的标准溶液于分液漏斗中，加入 2ml50%的硫酸，加入 5ml正己烷，再加入2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置 5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入 25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈

6、震荡，静置 3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测。 2.4.2 空白试验 吸取 10ml超纯水于分液漏斗中，加入 2ml50%的硫酸，加入 5ml正己烷，再加入 2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置 5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入 25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈震荡，静置 3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测。2.4.3 样品的处理 1.取 1020g 样品置于 50ml容量瓶中，加入 25ml水溶解，再加入2ml亚铁氰化钾溶液和 2ml乙酸锌溶液。剧烈震摇，静置 15min，然后用水定容至刻度，混匀，过滤。 2.

7、吸取滤液 10ml于分液漏斗中，加入 2ml50%的硫酸，加入 5ml正己烷，再加入 2.0ml次氯酸钠溶液，剧烈震荡，然后静置 5min，使水相和有机相分层，除去水相。再加入 25ml5%的碳酸氢钠溶液，剧烈震荡，静置 3min，分层后除去水相，提取有机层放入小试剂瓶中保存，冷藏待测（若有乳化现象，需离心取上清液后保存） 。 3 样品处理关键步骤对甜蜜素检测的影响结果 3.1 硫酸浓度的影响 准确吸取 1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为 30%、40%、50%、60%、70%的硫酸，按 2.4.32 的方法进行处理和测定，得知，加入 50%的硫酸时

8、峰面积最大、灵敏度最高。故采用 50%的硫酸 2ml作为调节 PH值最佳。 3.2 次氯酸钠用量的影响 准确吸取 1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为 50%的硫酸，再分别加入 0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml次氯酸钠溶液，按 2.4.32 的方法进行处理和测定，得知，加入 2ml次氯酸钠时衍生较完全，杂质峰较少。故采用 2ml次氯酸钠作为调节 PH值最佳。 3.3 碳酸氢钠钠用量的影响 准确吸取 1.0ml20ug/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，按2.4.32 的方法进行处理和测定。 环已基氨基磺酸钠在强酸的条件下与次氯酸钠反应生成 N，N-二氯环已基胺，经正己烷萃取后，仍残留次氯酸钠，因次氯酸钠会损坏色谱柱，所以残留的次氯酸钠必须除去。通过实验测定，5%的碳酸氢钠 25ml充分洗涤 1次，可出去残留的次氯酸钠。故采用 5%的碳酸氢钠 25ml为最佳。 4 干扰实验 在测定条件下，于 20ug/ml的甜蜜素标准溶液中加入各种干扰物质，测定结果表明，在相对标准偏差小于 5%时，100ug/ml 的糖精钠、100ug/ml的苯甲酸和山梨酸均不干扰甜蜜素的测定。