1、浅谈细胞培养技术陈巧玲2017-9-17主要内容n 细胞培养前的准备n 细胞的原代培养n 细胞的传代培养n 细胞冻存与复苏n 培养细胞的污染离心机 橱柜 实验台冰箱 培养箱试剂柜 实验仪器台超净工作台实验台实验台实验台实验台水池冰箱衣柜实验台显微镜递物窗缓冲间 无菌操作室准备室1.细胞培养室设置一、细胞培养一、细胞培养 前的实验准备前的实验准备下风口上风口无菌操作室超净工作台和 CO2培养箱2.细胞培养的主要实验设备n超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐 徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 nCO2培养箱设定的条件为 37
2、， 5 CO2 n使用 CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： 用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。 保持培养箱内空气干净。定期消毒 箱内蒸馏水槽中预留灭菌蒸馏水，以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。解剖显微镜 倒置显微镜2.细胞培养的主要实验设备血清（天然成分）：基础培养基（人工合成）：干粉培养基 DMEM 、 -MEM、 RPMI1640水：高纯度的去离子水3.细胞培养的主要试剂（培养基）抗菌素：通常是青霉素和链霉素联合使用，使用浓度为 100U/mln 血清质量好坏是实验成败的关键。n 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。n 优质血清
3、的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体病毒污染。n 血清的灭活（消除补体活性）： 56 ， 30 分钟n 血清的消毒：过滤除菌n 血清的使用浓度为 5 20消化液：常用 0.25胰蛋白酶，使细胞脱离组织或容器壁，用含血清培养液中止其活性4.细胞培养用器皿的清洗和消毒 一般玻璃器皿的清洗分为四个步骤：1、自来水浸泡2、洗涤剂刷洗 (如有必要进行超声处理）3、 泡酸 （浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水）4、流水冲洗过夜，依次用蒸馏水、三蒸水漂洗，最后烘干备用 常用消毒方法：1、湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌）， 15磅， 15 20min2、过滤除菌 (如：血清的除菌）细胞培养 (cell culture)是指细胞的离体培养，是在 无菌条件 下，把动物或植物的细胞从机体中分离出来，置于培养皿中，并在一个合适的环境中，给以营养物质，使之继续生存和繁殖的方法。细胞培养细胞培养（ Cell Culture）细胞培养的基本概念细胞培养的基本概念培养细胞的类型培养细胞的类型v 贴附型 成纤维样细胞型 上皮样细胞型v 悬浮型细胞培养的基本概念细胞培养的基本概念培养人真皮成纤维细胞培养人口腔上皮细胞培养的骨髓瘤细胞
