基因工程原理试题.doc

1、基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1 基因工程是 70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2 基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作 ， (2)细胞水平上的表达 3 基因克隆中三个基本要点是： 克隆基因的类型 ； 受体的选择；载体的选择 4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 限制性酶切图谱 。 5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自 属名的第一个字母 ，第二、三两个字母取自 _种名的前两个字母 ，第四个字母则用 株名 表示。 6部分酶切可采

2、取的措施有： (1)减少酶量； (2)缩短反应时间； (3)增大反应体积等 。 7第一个分离的限制性内切核酸酶是 EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 _ EcoRl。 8限制性内切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同，但识别的序列都是 GGCC，它们属于 异源同工酶 。 9 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草杆菌蛋白酶 切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1) 5-3合成 酶的活性 ； (2) 3-5外切核酸酶 的活性。 10为了防止 DNA 的自身环化，可用 碱性磷酸酶 去双链 DNA_5端的磷酸基团

3、 。 11 EGTA 是 _Ca2+_离子螯合剂。 12测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它只有 _ 5-3合成 酶的活性，而没有 3-5外切 酶的活性。 13切口移位 (nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I的 _5一 3外切核酸酶 和 5一 3合成酶 的作用。 14欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 分子转变成平末端的双链形式，通常可采用 _ S1 核酸酶切割 或 DNA 聚合酶补平 。 15反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有 _核酸水解酶 H 的作用，可以将DNA- RNA 杂种双链中的 _RNA_水解掉。 16基因工程

4、中有 3 种主要类型的载体： 质粒 DNA，病毒 DNA，质粒和病毒DNA 杂合体 。 17就克隆一个基因 (DNA 片段 )来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源 DNA 的插入 。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18 一个带有质粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 质粒消除 (或治愈 ) 。 19 pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来 不出质粒，这种现象叫源于 pMBl ，它的四环素抗性基 因来自于 pSCl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 pSF2124(R 质

5、粒 )。 20 YAC 的最大容载能力是 1000kb ， BAC 载体的最大容载能力是 300kb 。 21 pSCl01 是一种 严紧 复制的质粒。 22 pUCl8 质粒是目前使 用较为广泛的载体。 pUC 系列的载体是通过 pBR322 和M13 两种质粒改造而来。它的复制子来自 pMBl ， Amp 抗性基因则是来自 转座子。 23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源 DNA 的扩增 ； 二是 对某些噬菌体 (如 噬菌 )的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 。 24 野生型的 M13 不

6、适合用作基因工程载体，主要原因是 没有合适的限制性内切核酸酶 识别位点 和 选择标记 。 25 黏粒 (cosmid)是质粒 噬菌体杂合载体，它的复制子来自 质粒 、 COS 位点序列来自 噬菌体 ，最大的克隆片段达到 45 kb。 26 野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体，原因是： (1) 分子量大，(2)酶的多切点， (3)无选择标记 27噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 复制区 ，而来自噬菌体的主要结构是 IG 区 。 28 噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源 DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基 因组的 75 105 的范围内。 29

7、 在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如 EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 螯合 Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 。 30 用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在 DNA 溶液中加人单价的阳离子，如 NaCl和 NaAc， 其目的是 中 和 DNA 分子的负电荷，增加 DNA 分子间的凝聚力 。 31 引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途： (1)合成探针； (2)合成 cDNA；(3)用于 PCR 反应； (4)进行序列分析 32 Clark 发现用 Taq DNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物

8、的 T 载体 。 33在 cDNA 的合成中要用到 S1 核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成的发夹环 34乙醇沉淀 DNA 的原理是 乙醇使 DNA 分子脱水 。 35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36 受体细胞的感受态是 接受外源 DNA 的生理状态 _。 37 DNA 重组连接的方法大致分为四种： (1)黏性末端连接； (2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 。 38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个 基因组 DNA 克隆_，各

9、种此类质粒的集合体称之为构建了一个 基因组 DNA 文库 。 39将含有一个 mRNA 的 DNA 拷贝的克隆称作一个 cDNA_克隆 ，源于同一批RNA 制备物的克隆群则构建了一个 _ cDNA 文库 _。 40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用 _聚合酶链式反应(PCR)可以将这段 DNA 进行百万倍的扩增。 41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 0C 时吸附 DNA, 42C _时摄人 DNA。 42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为 ： (1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法

10、等。 43 PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于 _插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 。 44 核酸杂交探针可分为两大类： DNA 探针和 RNA 探针。其中 DNA 探针又分为 _基因组 DNA 探针和 cDNA 探针。 45如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5突出的 黏性末端，则可以用_ Klenow 酶填补的方法 _进行 3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA产生的是 3突出的黏性末端，可以用 _ T4DNA 聚合酶 进行 3末端标记。 46单链 DNA 探针的标记可以采用下列方法： (1)用 M13 噬菌体载体合成单链DNA 探针

11、； (2)从 mRNA 反转录合成单链 cDNA 探针； (3)用不对称 PCR合成单链 DNA 探针。 47根据 Northern杂交的结果可以说明： 外源基因是否进行了转录 _。 48差示杂交 (differential hybridization)技术需要 _两种不同 的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因 。 49 RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜 (尼龙膜 ) 上，同一放射 DNA 探针杂交的技术称 _ Northern印迹 _。 50在 _ Southern印迹 _技术中， DNA 限制性

12、片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜 (或尼龙膜 )上，然后与放射性的 DNA 探针杂交。 51可用 T4 DNA 聚合酶进行平末端的 DNA 标记，因为这种酶具有 _53合成酶 _和 _3 5外 切核酸酶 _的活性。 52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素 ： (1)克隆的是完整的基因； (2)使用的是表达载体； (3)不含内含子 。 53 Northern印迹和 Southern印迹有两点根本的区别： (1)印迹的对象不同： Northern 是 RNA， Southern 是 DNA； (2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件。 54放射免疫筛选的原

13、理基于以下三点： (1)抗体能够被吸附到固体支持物上； (2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记 二、选择题 (单选或多选 ) 1 因研究重组 DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是 ( ) (a)A Kornberg (b)W Gilbert (c)P Berg (d)B McClintock 2 第一个作为重组 DNA 载体的质粒是 ( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 3 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有 ( )不太恰当。 (a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内 切

14、核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制 -修饰系统 4型限制性内切核酸酶： ( ) (a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的 ?( ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列 (识别位点 )对 DNA 进行切割 (c)同一种限制酶切割 DNA时留下的末端序列总是相同的 (d)一些限

15、制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链 DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链 DNA，产生平末端 6第一个被分离的类酶是： ( ) (a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB 7在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制那一项最好 ?( ) (a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度 8在下列试剂中，那一种可以螯合 Ca2+离子 ?( ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA 9在下列工具酶中，那一种可以被 EGTA 抑制活性 ?( ) (a)S1 单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)

16、Bal 31 核酸酶 10限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( ) (a)双链 DNA 的特定碱基对 (b)双链 DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码 (d)以上都正确 11下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是 ( )。 (a)Sau3A I (b)E coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12限制性内切核酸酶的星号活性是指： ( ) (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快 (d)识别序列与原来的完全不同 13下面哪一种不是产生星号活性的主要原因 ?( ) (a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有

17、有机溶剂 (c)含有非 Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低 14关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有 ( )不太恰当 (a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制 -修饰系统 15在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用 ( ) (a)T4DNA 聚合酶 (b)Klenow 酶 (c)大肠杆菌 DNA 聚合酶 I (d)T7DNA 聚合酶 16末端转移酶是合成酶类， ( ) (a)作用时不需要模板 (b

18、)在 Ca2+的存在下，可以在突出的 3，末端延长 DNA 链 (c)在 Ca2+的存在下，可以在隐蔽的 3，末端延长 DNA 链 (d)上述说法有两种是正确的 17在基因工程中，可用碱性磷酸酶 ( ) (a)防止 DNA 的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行 DNA的 5，末端标 记 (c)制备突出的 3，末端 (d)上述说法都正确 18下列酶中，除 ( )外都具有磷酸酶的活性 (a)核酸外切酶 (b)外切酶 (c)单核苷酸激酶 (d)碱性磷酸酶 19 下列哪一种酶作用时需要引物 ? ( ) (a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d)DNA 连接酶 20 S1 核酸酶的功能是

19、 ( ) (a)切割双链的 DNA (b)切割单链的 RNA (c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确 的 21 Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了 ( )的活性。 (a)5， -3，合成酶， (b)3， -5，外切酶 (c)5， -3，外切酶 (d)转移酶 22 下面关于松弛型质粒 (relaxed plasmid)性质的描述中， ( )是 不正确 的 (a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约， 因而有较多的拷贝数 (b)可以在氯霉素作用下进行扩增 (c)通常带有抗药性标记 (d)同 严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子 23 基因

20、工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载 体中只有 ( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体 (a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8 24 下列哪种克隆载体对外源 DNA 的容载量最大 ?( ) (a)质粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色体 (YAC) (d) 噬菌体 (e) cDNA 表达载体 25. 松弛型质粒： ( ) (a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增 (c)一般没有选择标记 (d)上述 (a)、 (b)两项正确 26 Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( ) (a)是松弛复制型

21、 （ b)具有，四环素抗性 (c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素 27同一种质粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它 们的迁移速率是： ( ) (a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA 28 pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ( ) (a)ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl8 29关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确 ?( ) (a)在不同的宿主中具有不同的复制机制 (b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点

22、 (c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 (d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率 30能够用来克隆 32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是 ( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid 31第一个作为重组 DNA 载体的质粒是 ( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 32. Ti质粒： ( ) (a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链 DNA 被转移 (c)在植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的 vir基因帮助转移 (f)在植物细胞

23、中作为染色体外质粒 33黏粒 (cosmid)是一种人工建造的载体， ( ) (a)它具有 COS 位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒 DNA的复制特性 (c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化 反应 34有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法 (Maxam-Glbert)和酶学序列分析法 (Sanger)。酶学测序法的基本原理优点是： ( ) (a)碱基与特殊染料间不同的相互作用 (b)一个合成引物的延伸和 DNA 修复合成的可靠终止 (c)限制性位点与 DNA 末端标记的相关性 (d)可同时对 DNA 双螺旋的两条链进行测序 (e)反应是

24、DNA 特异的， RNA 不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。 35关于 cDNA 的最正确的说法是： ( ) (a)同 mRNA 互补的单链 DNA (b)同 mRNA 互补的双链 DNA (c)以 mRNA 为模板合成的双链 DNA (d)以上都正确 36用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为： ( ) (a)染色体 DNA 断成了碎片 (b)染色体 DNA 分子量大，而不能释放 (c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀 37. 关于碱解法分离质粒 DNA，下面哪一种说法 不正 确 ?( ) (a)溶液 I 的作用是悬浮菌体

25、(b)溶液的作用是使 DNA 变性 (c)溶液的作用是使 DNA 复性 (d)质粒 DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 38. Clark 做了一个有趣的实验，发现 TaqDNA 聚合酶可以不需要模板，在双链DNA 的 末端加一个碱基，主要是加 ( ) (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP 39根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、 cDNA 文库等。 在下列文库中， ( )属 cDNA 文库 (a) YAC 文库 (b) MAC 文库 (c) 扣减文库 (d) BAC 文库 40下面关于多克隆位点 (multiple clone site,MCS

26、)的描述， 不正确 的 句是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列 (c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中 41在 cDNA 技术中，所形成的发夹环可用 ( ) (a)限制性内切核酸 酶切除 (b)用 3外切核酸酶切除 (c)用 S1 核酸酶切除 (d)用 5外切核酸酶切除 42在 DNA 的酶切反应系统中，通常： ( ) (a)用 SSC 缓冲液 (b)加入 Mg2+作辅助因子 (c)加入 BSA 等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的 43 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且 ( ) (a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体

27、不易环化 (d)影响外源基因的表达 44在下列表型中， ( )是基因工程上 理想的受体菌表型 (a)r+m+rec* (b)r-m-rec- (C)r-m-rec+ (d)r+m+rec- 45关于 DNA 接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项 不正确 ?( ) (a)给外源 DNA 添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件 46 cDNA 文库包括该种生物的 ( ) (a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和 调控区 47下列关于建立 cDNA 文库的叙述中，哪一项是 错误 的 ?( ) (a)从特

28、定组织或细胞中提取 DNA或 RNA (b)用反转录酶合成 mRNA 的对应单链 DNA (c)以新合成的单链 DNA 为模板合成双链 DNA (d)新合成的双链 DNA 甲基化 48下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是 不正确 的 ? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段 (c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率 49关于感受态细胞性质的描述，下面哪 一种说法不正确 ?( ) (功具有可诱导性 (b)具有可转移性 (c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的 50下面关于用 T4多核苷酸激酶标记 5 端制备探针的描述中 ( )是 不正确 的

29、。 (a)既能标记 DNA，又能标记 RNA (b)既能标记双链 DNA 又能标记单链 DNA (c)只能标记突出的 5 端不能标记其他类型末端 (d)DNA 或 RNA 必须有 5-OH的存在 51 Southem印迹的 DNA 探针 ( )杂交。 (a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的 DNA 片段 (c)可与任何含有互补序列的 DNA 片段 (d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的 DNA 片段 (e)以上都是 52 用下列方法进行重组体的筛选，只有 ( )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western 印迹 (d

30、)原位菌落杂交 53下列哪一个不是 Southern印迹法的步骤 ?( ) (a)用限制酶消化 DNA (a)DNA 与载体的连接 (c)用凝胶电泳分离 DNA 片段 (d)DNA 片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用一个标记的探针与膜杂交 54 报告基因 ( ) (a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区 (c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性 55 在利用 lacZ 失活的显色反应筛选法中， IPTG 的作用是 ( ) (a)诱导宿主的 肽的合成 (b)诱导宿主的 肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (

31、d)作为显色反应的指示剂 56. 切口移位是指在 ( )作用下，使 ( )带上放射性标记。 (a)DNA 聚合酶 I， RNA (b)DNA 聚合酶 I， DNA (c)DNA 聚合酶， RNA (d)DNA 聚合酶， DNA 57用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的 ( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原 58 Southern印迹是用 DNA 探针检测 DNA 片段，而 Northern印迹则是： ( ) (a)用 RNA 探针检测 DNA 片段 (b)用 RNA 探针检测 RNA 片段 (c)用 DNA探针检测 RNA 片段 (d)用 DNA 探针检测蛋白质片段

32、59用免疫化学法筛选重组体的原理是 ( ) (a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达 (c)根据 mRNA同 DNA 的杂交 (d)根据 DNA 同 DNA 的杂交 60随机引物标记探针，下列各项中哪一项是 不正确 的 ?( ) (a)双链 DNA、单链 DNA、 RNA 都是可以标记的 (b)不需要用 Dnase I 预处理 (c)反应时可用 Klenow 酶 (d)反应时可用 DNA聚合酶 1 61在切口移位标记 DNA 探针时只能使用 ( ) (a)Klenow 酶 (b)DNA 聚合酶 I (c)DNA 聚合酶 (d)DNA 聚合酶 62要对一双链的 DNA 分子进行 3末端

33、标记，可用 ( ) (a)Klenow 酶 (b)DNA 聚合酶 I (c)T4DNA 聚合酶 (d)T7DNA 聚合酶 答案 1 c； 2 c； 3 b； 4 b 5 b， C， d， e； 6 c； 7 b； 8 d； 9 d； 10 B； 11 d； 12 a； 13 d； 14 b 15 d； 16 c； 17 a， b； 18 a； 19 c；20 d； 21 c； 22 C； 23 b； 24 C； 25 d； 26 a， C， d； 27 b； 28 c； 29 b； 30 a； 31 c； 32 a,c,d,e， 33 a， b， c； 34 b； 35 c； 36 c； 37

34、 d； 38 b； 39 c； 40 a； 41 c； 42 a， b， c； 43 b； 44 b； 45 d； 46 a；47 a； 48 c； 49 c； 50 b； 51 c； 52 c； 53 b； 54 a,c,d； 55 a； 56 b； 57 a， b； 58 c； 59 a； 60 d； 61 b； 62 c； 三、简答题 1说明 Sanger DNA 测序法的原理。 Sanger DNA 测序法是建立在两个基本原理之上： (1)核酸是依赖于模板在聚合酶的 作用下由 5端向 3端聚合 (DNA 聚合酶参与了细菌修复 DNA 合成过程 )； (2)可延 伸的引物必须能提供游离的

35、 3羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的 3羟基末 端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用 4 种双脱氧核苷酸终止反应，则会获 得 4 组长度不同的 DNA 片段。通过比较所有 DNA 片段的长度可以得知核苷酸的 序列。 2某学生在用 EcoRI 切割外源 DNA 片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因 ? 盐离子浓度 不对，温度不对，甘油浓度过高。 3在序列 5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个 6bp 的类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么 ? 回文序列是： 5-CATATG-3， 4下面几种序列中你认为哪一个 (哪些 )最有可能是类酶的识别序列： GAATC

36、G， AAATTT， GATATC， ACGGCA? 为什么 ? GATATC； AAATTT，因为它们是回文序列。 5当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施 ? 为什么 ? 注意星活性，先低盐，后高盐 ；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一 种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。 6 为什么反转录酶在聚合反应中会出错 ? 由于反转录酶缺少在 E coli DNA 聚合酶中起校正作用的 3-5外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的 dNTP 和 Mg2+下，每 500 个碱基中可能有一个错配。 7 什么是测序酶 (s

37、equenaseTM)? 所谓测序酶即是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去 28 个氨基酸，这样使 T7 DNA 聚合酶完 全失去了 3-5的外切核酸酶活性，只有 5-3聚合酶的活性，而且聚合能力提高了 3 9 倍，测序时常用此酶。 8 什么是 S1 核酸酶作图 (S1 nuclease mapping)? S1 核酸酶作图是一种对 RNA 转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法 9 YAC 载体具有什么样的功能性 DNA 序列 ?为什么在克隆大片段时， YAC 具有优越 性 ? YAC 带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个 DNA 复制起

38、点，两个端粒。 YAC 能够容纳长达几百 kb 的外源 DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大 片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。 10 列举质粒载体必须具备的 4 个基本特性。 (1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。 11 什么叫穿梭载体？ 含有细菌质粒和克隆的真核生物 DNA 片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主 (来回穿梭 )。 12 如何将野生型的 噬菌体改造成为一个理想的载 体 ? (1

39、)削减分子量 (除去非必需区和整合区 )； (2)削减酶切位点； (3)添加选择标记； (4)引入终止突变 13 PCR 的基本原理是什么 ?用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息 ? (1)DNA 半保留复制的原理，在体外进行 DNA 的变性、复性和引物延伸。 (2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA 序列。 14 cDNA 克隆与基因组克隆有何不同 ? 基因组克隆包含所有不在 cDNA 中出现的内含子。 15 怎样将一个平末端 DNA 片段插入到 EcoR I 限制位点中去 ? 化学合成一些长为 10bp 含有 EcoRI 识别位点的短的 DNA 片段，然后与待克隆片段

40、两端连接起来，如果用 EcoRI 切割这种连接片段，就会产生 EcoRI 的单链末端。这种片段就可以插入到任何 EcoRI 的限制性内切酶位点中 16 简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。 (1)COS 位点可以自身环化； (2)可以利用 COS 位点包装 噬菌体颗粒； (3)可以感染寄主细胞； (4)利用质粒复制子复制，不整合、不裂解。 17 酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必 须有哪些基本的结构 ? (1)着丝粒； (2)端粒； (3)ARS 序列。 18 何谓 YAC? 主要特性是什么 ? (1)含有来自其他生物 DNA 的酵母人工染色体，叫 YAC； (2)主要特性是可以克隆较大

41、的外源片段。 19 Muller 的 PCR 反应同大肠杆菌体内的 DNA 复制有哪些不同 ?你认为根本的差别在 哪里 ? PCR 用双引物，体内复制用单引物。 20欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物 (如 E coli)中进行表达，克隆时应 注意哪些问题 ? 应注 意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌。 21假定你分离到一个 E coli 的 Thy- 突变体，并推测有可能是 ThyA 基因突变。请设计 一个方案用 PCR 从染色体 DNA 扩增突变的 ThyA 基因，测定突变的序列。(注： E coli 野生型的 ThyA 基因的序列是已知的 ) 为了扩增突变体的 thyA 基因，先设计一对引物，其中一个引物的序列与 thyA基因的 5端相同，另一个引物同该基因的 3端互补。在引物的 5端加上合适类限制性内切核酸酶的识别序列，以便于后来的克隆。将染色体 DNA 同引物混合后，进行 PCR 扩增。 然后进行琼脂糖凝胶电泳，纯化扩增片段，可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。 22 你在做 Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤 是用 NaOH 溶液浸泡凝胶，使 DNA 变性为单链。为了节省时间，你略过了