DEC1 和HIF―1α在喉咽部鳞状细胞癌中的表达及意义.doc

1、DEC1 和 HIF1 在喉咽部鳞状细胞癌中的表达及意义摘要：目的 探讨分化型胚胎软骨发育基因 1（Differentiated embryo?Cchondrocyte expressed gene 1，DEC1）和低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）在喉咽部鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法 运用免疫组织化学法检测 60例喉咽部鳞癌组织和相应癌旁正常黏膜中 DEC1和 HIF-1 表达情况，分析它们的临床意义。结果 DEC1和 HIF-l 在癌中的阳性表达率分别为 88.33%和63.33%，相应癌旁正常上皮分别为 3.33%和 0%，差异

2、有统计学意义（两者 P50 岁 41例，高分化 23例，中分化 31例，低分化 6例，有淋巴结转移 20例，无淋巴结转移 40例，根据 WHO临床分期标准分 I期 15例，II 期 22例，III 期 18例，IV 期 5例。所有标本均来自手术患者，患者术前均未进行放、化疗。组织 4%中性缓冲甲醛固定，常规石蜡包埋，DEC1 和 HIF-1 一抗购自美国 Sigma，快捷型酶标羊抗鼠/兔 IgG聚合物，DAB 显色试剂盒，柠檬酸盐抗原修复液，PBS粉剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。 1.2 免疫组织化学 石蜡组织 3 m 厚切片，免疫组织化学采用EnvisionTM法进行检测 DEC1表

3、达。切片经过柠檬酸盐液高压锅抗原修复，DEC1和 HIF-1 分别以 1500 和 1100 浓度稀释使用，37孵育 1h，快捷型酶标羊抗鼠/兔 IgG聚合物孵育 15 min，DAB 镜下控色，苏木素复染细胞核，常规封片。 1.3 结果判断 DEC1阳性表达主要定位在细胞浆，显示为棕黄色颗粒沉淀。所有结果由两位高年资病理医师进行独立双盲观察，判断标准参照文献5。HIF-1 阳性判断标准：细胞核呈棕黄或棕褐色着色，染色评分参照文献6。 1.4 统计学方法 采用 SPSS 13.0统计软件进行数据分析，DEC1 表达情况与喉咽部鳞状细胞癌临床病理特征的关系采用 Pearson 2 检验分析，相关

4、性分析采用 Spearmans等级相关分析，P0.05 为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 DEC1和 HIF-1 在喉咽部鳞癌中的表达 DEC1和 HIF-1 在 60例喉咽部鳞状细胞癌中分别有 53例和 38例阳性表达，见图 1和图 2，阳性率分别是 88.33%和 63.33%，DEC1 在喉咽部正常黏膜上皮中绝大部分呈阴性表达，仅有 2例呈弱阳性表达，阳性表达率 3.33%，HIF-1 在正常黏膜上皮全部阴性表达，DEC1 和 HIF-1 在癌和正常上皮之间的表达差异具有统意义（两者 P0.05） 。 2.2 DEC1和 HIF-1 与临床病理参数的关系 DEC1阳性表达率在喉咽

5、部鳞状细胞癌高分化与中低分化，+期与+期，有与无淋巴结转移间差异具有统计学意义（全部 P0.05） ，相关性分析显示 DEC1与中低分化、临床分期及淋巴结转移呈正相关关系（全部 P0.05） 。 3 讨论 DEC1 蛋白由 412个氨基酸组成，通过其磷酸化位点的激活发挥生理调节功能。DEC1 在正常组织如肝脏、肠道和软骨等有广泛的表达，在机体中发挥着重要的生理功能，例如免疫应答、神经发育、生物钟调控和细胞分化等7。在肿瘤发生机制中，DEC1 在不同组织类型和来源的功能有所不同，所起的作用可能存在差异。例如在结肠癌中 DEC1呈高表达8；但在肺癌中，有关 DEC1的表达的报道存在两种相反的结 论

6、9-10，这说明 DEC1在肿瘤中的作用机制尚待深入研究。 目前 DEC1在喉咽部鳞状细胞癌中的研究罕见。本研究结果显示 DEC1在喉咽部鳞状细胞癌的阳性表达率 88.33%，明显高于癌旁正常黏膜中的3.33%，这提示 DEC1表达与肿瘤的发生有关。并且中低分化的阳性表达明显高于高分化病例，+期病例表达明显高于+期，有淋巴结转移病例的 DEC1表达明显高于无淋巴结转移。进一步相关性分析显示 DEC1与中低分化、临床分期及淋巴结转移呈正相关关系，DEC1 与年龄、性别、肿瘤大小无关，这些提示 DEC1不受性别、年龄和肿瘤大小等影响，而与肿瘤的侵袭、转移能力有关。 肿瘤的恶性快速增殖往往导致肿瘤局

7、部处于缺氧状态， HIF-1 属于重要的缺氧标记物，它多种恶性肿瘤中表达增高，激活后可以调控下游多种靶基因的转录，维持肿瘤细胞的无氧代谢，促进新生血管形成，会促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移11。本研究中 HIF-1 在癌中的表达高于正常黏膜上皮，并且与淋巴结转移密切相关，提示 HIF-1 在喉咽部鳞状细胞癌的发生、侵袭和转移起到重要作用。分析全文可以推测 DEC1和 HIF-l 可能参与喉咽部鳞状细胞癌的发生和发展，并与肿瘤的侵袭和转移密切密切相关。进一步研究它们在喉咽部鳞状细胞癌中的作用及相互关系，可能对喉咽部鳞状细胞癌的防治具有潜在重要价值。 参考文献： 1Shi X H， Zheng Y，

8、 Sun Q， et a1. DEC1 nuclear expression： a marker of differentiation grade in hepatocellular carcinoma J.World J Gastroenterol， 2011， 17（15）：2037-2043. 2Wu Y，Sato F，Bhawal UK，et a1. Basic helix-loop-helix transcription factors DECl and DEC2 regulate the paclitaxel-induced apoptotic pathway of MCF-7 h

9、uman breast callcer cellsJ.Int J Mol Med， 2011， 27（4）：491-495. 3Gong L，Zhang W，Zhou J， et al. Prognostic value of HIFs expression in head and neck cancer： a systematic reviewJ.PLoS One， 2013， 8（9）：e75094. 4Ma W，Shi X，Lu S，et al.Hypoxia-induced overexpression of DEC1 is regulated by HIF-1 in heaptoce

10、llular carcinoma J.Oncol Rep，2013， 30（6）：2957-2962. 5许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准J.中国癌症杂志，1996，6（04）：229-231. 6钟启龙，王双乐，李创伟，等.乙酰肝素酶、蛋白激酶 CK2 与缺氧诱导因子-1 在鼻咽癌中的表达与患者预后的关系J.中国耳鼻咽喉头颈外科， 2012， 19（8）： 428-430. 7Yamada K， Miyamoto K.Basic helix-loop-helix transcription factors， BHLHB2 and BHLHB3； their gene expre

11、ssions are regulated by multiple extracellular stimuliJ.Front Biosci， 2005， 10：3151-3171. 8Li Y，Xie M， Song X，et l.DEC1negatively regulates the expression of DEC2 through binding to the E-box in the proximal promoterJ. J Biol Chem， 2003，278（19）：16899-16907. 9Falvella FS，Colombo F，Spinola M， et al. B

12、HLHB3： a candidate tumor suppressor in lung cancerJ.Oncogene，2008，27（26）：3761-3764. 10Giatromanolaki A，Koukourakis MI，Sivridis E，et al.DEC1？（STRA13） protein expression relates to hypoxia- inducible factor 1-alpha and carbonic anhydrase-9 overexpression in non-small cell lung cancer J. J Pathol， 2003， 200（2）：222-228. 11张博，赵刚.HIF-1 与肿瘤相关性研究进展J.实用肿瘤学杂志，2014，28（6）：565-568. 编辑/肖慧