1、HPLC 法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质摘 要目的：建立 HPLC 注射用盐酸表柔比星的有关物质。方法：采用色谱柱：Agela Venusil ASB C1 4.6250mm，流动相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含 0.2%的十二烷基硫酸钠的混合溶液，流速为 2.0ml/min，检测波长为 254nm；柱温为 40？C 测定。结果：采用该方法能将杂质与主成分有效分离，专属性良好，8 小时内溶液较稳定，耐用性强，经检测限试验证明该方法能有效检出杂质。结论：该方法简便，准确度高，专属性好，建议采用此法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质。 关键词HPLC 法 注射用盐酸表柔比
2、星 有关物质 中图分类号：R54041 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0024-01 本品用于治疗恶性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌等癌症、白血病、膀胱内给药有助于浅表性膀胱癌、原位癌的治疗和预防其经尿道切除术后的复发。本品参照注射用盐酸表柔比星质量标准（中国药典2010 年版二部）有关物质检查法1，采用药典方法部分杂质不能有效分离，本实验将色谱条件进行改进，并对此方法进行方法验证。 1.仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪，梅特勒 XP26 百万分之一电子天平。 1.2 试药 对照品：中国生物药品检验所；甲醇、乙腈：Dikma（色谱纯） ；
3、磷酸盐均为青岛海洋化工有限公司（分析纯） ；水：哈尔滨誉衡药业股份有限公司； 2.方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Agela Venusil ASB C1 4.6250mm，流动相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含 0.2%的十二烷基硫酸钠的混合溶液，流速为 2.0ml/min；检测波长为 254nm；柱温为 40？C。同时取多柔比星对照品和盐酸表柔比星对照品适量，加流动相制成每 1ml 中分别含 30g和 100g 的混合溶液，取 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图，表柔比星峰与多柔比星峰的分离度应大于 2.0。盐酸表柔比星峰的拖尾因子应在0.81.4。 2.2 辅
4、料干扰试验 按处方比例配制空白辅料溶液。取供试品及空白辅料溶液各 20？l，注入液相色谱仪，考察辅料及溶剂是否干扰测定。 结果，供试品溶液中各杂质峰分离度良好，各已知峰纯度均能达到999，空白辅料与溶剂均不干扰供试品杂质峰的检查，专属性良好。 2.3 检测限测定 取盐酸表柔比星、多柔比星酮、柔红霉素酮、多柔比星、盐酸柔红霉素、双氢盐酸柔红霉素、盐酸表柔红霉素对照品，配制，逐级稀释，测定各检测限分别为：145.22ng/ml、44.35ng/ml、42.67ng/ml、56.03ng/ml、195.95ng/ml、132.11ng/ml、141.15 ng/ml。此方法能有效检出样品中所含杂质。
5、 2.4 耐用性试验 在改变检测波长、流动相比例、流速、柱温、不同型号色谱柱条件下，取系统适用性溶液，注入液相色谱仪，结果各杂质峰分离度均符合要求。 2.5 溶液稳定性试验 精密称定供试品 28.37mg，置 10ml 量瓶中，供试品溶液在0、1、2、4、8 小时考察溶液的稳定性。结果：？8 小时内各杂质及盐酸表柔比星含量均无明显变化，供试品溶液在 8 小时内稳定性。 2.6 专属性试验 未破坏溶液：精密称取供试品 24.62mg，置 10ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 热破坏溶液：精密称取供试品 26.58mg，置 10ml 量瓶中，加 2ml 流动相使溶解，于 100水浴放
6、置 9 分钟，取出放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 酸破坏溶液：精密称取供试品 25.66mg，置 10ml 量瓶中，加 2ml 流动相使溶解，加 1mol/L 盐酸溶液 2ml 放置 2 小时，加 1mol/L 氢氧化钠溶液 2ml 中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 光破坏溶液：精密称取供试品 29.46mg，置 10ml 量瓶中，加 4ml 流动相使溶解，于光照条件下放置 3 天，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 氧破坏溶液：精密称取供试品 31.14mg，置 10ml 量瓶中，加 1ml10%过氧化氢放置 1 小时，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 碱破坏溶液：精密称取供试品
7、 30.12mg，置 10ml 量瓶中，加 2ml 流动相使溶解，加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 0.5ml，室温放置 1 小时，加0.1mol/L 盐酸溶液 0.5ml 中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 空白辅料同供试品相同方法制备。 结果：通过上述破坏试验，各条件均不同程度地产生了降解产物，各杂质峰与主峰间的分离度良好，本方法专属性强。 2.7 样品测定 取三批样品，加流动相制成每 1ml 中约含盐酸表柔比星 0.5mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，制成每 1ml 中约含 5g 的溶液，作为对照溶液。精密量供试品溶液和对照溶液各 20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至
8、主成分峰保留时间的 3 倍。结果：多柔比星分别为：0.38%，0.39%，0.38%。未知最大单杂分别为 0.18%，0.19%，0.19%。杂质总和分别为 0.68%，0.66%，0.65%：三批样品的杂质均能有效的检测出。3.讨论 通过有关物质方法学验证，该方法能将杂质与主成分有效分离，专属性良好，且在 8 小时内溶液稳定性良好，经检测限试验证明该方法能够有效检出杂质，方法耐用性、系统适用性良好。经对三批样品的检验，结果表明三批样品均符合检查规定，该方法可用于本品有关物质检查。其专属性强、准确度高、方法简便，建议采用此法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质。 参考文献： 1 中国药典 ，2010 年版二部注射用盐酸表柔比星质量标准。
