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念珠菌对两种抗真菌药物的敏感性对比分析.doc

1、念珠菌对两种抗真菌药物的敏感性对比分析摘要:目的 检测念珠菌对 2 种抗真菌药氟康唑、伊曲康唑的体外药物敏感性,指导临床选择敏感的抗真菌药物。方法 实验受试菌株共 40株,均来自于 2013 年 1 月2014 年 11 月我院皮肤科患者送检的标本,均证实为念珠菌。用 M27-A2 法测试念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的敏感性。结果 结果显示氟康唑、伊曲康唑对念珠菌的敏感率分别为75.5%、67.5%。结论 氟康唑、伊曲康唑对念珠菌均具有较好的敏感性,本实验结果显示两者无明显差异,因氟康唑价格相对低廉,且对念珠菌的抗菌作用较好,仍可作为念珠菌感染的主要治疗药物。 关键词:念珠菌;抗真菌药;药敏试验

2、念珠菌属一共含有 163 种菌种,存在于正常人的皮肤、呼吸道、消化道以及泌尿生殖道等部位,是人体的正常菌群,属于条件致病菌。随着广谱抗生素的广泛应用及宠物饲养量不断增多,皮肤真菌病的发病率有逐年增多的趋势。且病原菌感染的类型、致病病菌等,也呈现出明显的地区差异1。对此,本文选择最常用的 M27-A2 法进行对比,选择的药物为目前应用较多的氟康唑以及伊曲康唑,从念珠菌对两种抗真菌药的敏感性以及耐药性的差异,为临床念珠菌病(candidiasis)发现耐药菌株以及治疗提供依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 所用 40 株受试菌株,均来自于 2013 年 1 月2014 年11 月我院皮肤科患

3、者送检的标本临床分离株。按常规方法及科玛嘉念珠菌显色培养基联合进行菌株鉴定。以沙氏培养基 4冰箱保存。质控菌株采用 CLSI 推荐的质控株。所选药物均由厂家直接提供,所有药物均在有效期内。 1.2 方法 根据 CLSL/NCCLS 推荐的酵母微量稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案 M27-A22严格进行操作,对分离的念珠菌进行氟康唑、伊曲康唑敏感性试验,方法如下。 1.2.1 药液的配置 实验前,分别将配置好的贮存的药液取出,置35温箱孵化解冻。然后用稀释液 RPMI-1640(内含 1%葡萄糖)进行倍比稀释,三种药液的配置如下:氟康唑:取药液先作 19 稀释,得到10 倍终浓度(128 g/m

4、l) ,然后将药液以 2 倍梯度倍比稀释,得到 10个梯度实验浓度的药液。氟康唑的终质量浓度范围在 0.12564 g/ml。伊曲康唑:取药液先作 19 稀释,得到 10 倍终浓度(160 g/ml) ,再次作 19 稀释,得到 10 倍终浓度(16 g/ml) ,然后将药液以 2 倍梯度倍比稀释,得到 10 个梯度实验浓度的药液。伊曲康唑的终质量浓度范围为 0.031316 g/ml。 1.2.2 受试药敏板的制备 在无菌 96 微孔板中用加样枪每行从第212 孔每孔分别加入配置好的(15)103CFU/ml 二倍终浓度菌悬液100 l;从第 211 孔,每孔加入药液 100 l,第 1、2

5、、3 行的药液分别为氟康唑、伊曲康唑,浓度按配置好的浓度范围由高到低;第12 孔加不含药的 RPMI1640 液基 100 l(作阳性对照) ;第 1 孔加入不含药的 RPMI1640 液基 200 l(作阴性对照) 。 1.2.3 质控药敏板的制备 方法同受试药敏板。质控株 MIC 结果稳定,质控株包含在每一次药敏试验中。 1.2.4 培养 将制备好的药敏板加盖后置 35恒温培养箱中进行孵育,培养 48 h,进行结果判定。 1.3 结果判定 评分标准:与生长对照孔相比肉眼观察完全透明或未见生长为 0 分;雾状混浊为 1 分(念珠菌 80%生长受抑制) ;浊度明显降低为 2 分(念珠菌 50%

6、生长受抑制) ;浊度轻度下降为 3 分;浊度未降低为 4 分。遇有团块、颗粒形成时用吸打、混悬器等技术分离混匀。本试验对 Itraconazole、Fluconazole 采取评分 1 分(即 80%生长受抑制,肉眼观察为雾状混浊)为判定终点基准 MIC。当药物的 MIC 值超过或低于测定范围时,按以下方法进行统计:当 MIC 值高于最高浓度 64 g/ml 或16 g/ml 时,按64 g/ml 或8 g/ml 计算,记为耐药;当 MIC 值为最低浓度以下时,则按0.03 g/ml 或0.0125 g/ml 计算,记为敏感。 1.4 统计学分析 应用 SPSS 13.0 统计软件,采用 2

7、检验对两种药敏试验方法进行对比分析。 2 结果 对于念珠菌对药物的敏感性,本研究现采用 M27-A2 方案对临床应用较早、价格相对低的氟康唑与近些年应用较广的伊曲康唑作对比分析。念珠菌对两种药的敏感性实验结果,见表 1。 用 SPSS 对其进行 2 检验,2=0.600,P=0.438,P0.05,表明两种药物对念珠菌的敏感性无明显差异,对念珠菌而言两者都是很好的抗菌药物。这与有些文献报道不符,考虑可能为样本量小或地区念珠菌敏感性差异有关。 3 讨论 本实验分别采用 M27-A2 法,测定 40 株临床分离念珠菌 MIC 值,试验表明,大多数菌株对所测的唑类药物是敏感的。氟康唑应用于念珠菌之间

8、的体外药敏试验研究最多。NCCLS 的判定折点为:MIC8 mg/L 敏感,1632 mg/L 是中介性敏感(I) ,64 mg/L 则为耐药。本药敏试验结果显示 75.5%的念珠菌对氟康唑敏感性较好,低于部分文献报道3,考虑可能与念珠菌的耐药性增加相关,但是有研究报道药敏试验提示耐药者仍有对治疗反应良好的现象。伊曲康唑用于念珠菌的体外药敏试验的研究相对氟康唑较少。M27-A 规定的判定折点为 MIC0.125 mg/L 为敏感,0.250.5 mg/L 为 S-DD,1 mg/L 则为耐药。MIC 为 S-DD 和耐药的菌株对伊曲康唑的反应差。 近几年,由于念珠菌感染的发病率和耐药率逐年增多

9、,甚至较少见的头癣也时常见到,它主要通过人与人、人与患病动物相互接触而引发4。为了提高对真菌病的诊断和治疗水平,临床微生物实验室需密切配合临床,做好真菌的常规检验的同时,应积极开创和改进真菌药敏试验方法,氟康唑、伊曲康唑对念珠菌均具有较好的敏感性,本实验结果显示两者无明显差异,因氟康唑价格相对低廉,且对念珠菌的抗菌作用较好,仍可作为念珠菌感染的主要治疗药物。此外,临床医生也应提高对药物敏感性测定的重要性认识,应用药敏试验,选择敏感的药物,减少耐药菌的出现。 参考文献: 1王迎林,陆祖萍,项彤,等.宁波地区浅部真菌病 3637 例致病菌的菌种分析J.中国皮肤性病学杂志,2012,26(10):9

10、00-901. 2王端礼.医学真菌学实验室检验指南M.1 版.北京:人民卫生出版社,2005:103-104. 3Brunella Posteraro,Rosa Martucci,Marilena La Sorda.Reliability of the Vitek 2 Yeast Susceptibility Test for Detection of In Vitro Resistance to Fluconazole and Voriconazole in Clinical Isolates of Candida albicans and Candida glabrataJ.Journal

11、 of Clinical Microbiology, 2009,47(6):1927-1930. 4Ali,Rezaei-Matehkolaei Koichi, Makimura G Sybren,de Hoog Mohammad Reza,et al.Multilocus differentiation of the related dermatophytes Microsporum canis,Microsporum ferrugineum and Microsporum audouiniiJ.Journal of medical microbiology,2012,61(Pt 1):57-63. 编辑/罗茗柯

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