一种新的检测CIC的方法与结缔组织病的相关性研究.doc

1、一种新的检测 CIC 的方法与结缔组织病的相关性研究摘要：目的 探讨自主开发的一种新的检测循环免疫复合物（circulating immune complex， CIC）的方法在结缔组织病中的应用价值。方法 应用速率透射比浊法，上生化分析仪迅速比较系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus， SLE） 、类风湿关节炎（rheumatoid arthritis， RA）及干燥综合征（ sjogren syndrome， SS）等结缔组织病患者血清中 CIC与健康人血清之间的差异。结果 SLE、RA 及 SS这三种结缔组织病患者血清中 CIC与健康人相比有统计学意义（

2、P0.05） 。结论 SLE、RA 及 SS患者的血清 CIC水平高于健康对照组，因此这种检测 CIC的新方法可作为判断疾病的临床指标。而且，这种新方法，即采集标本后可立即应用生化分析仪检测，便于大样本大批量的基础筛查和结果判读，速度快，敏感性、准确性更高，能快速间接反映体内的 CIC的含量，更易于作为病情、疗效观察指标。 关键词：循环免疫复合物；系统性红斑狼疮；类风湿关节炎；干燥综合征 结缔组织病，以疏松结缔组织粘液样水肿及纤维蛋白样变性为病理基础的一组疾病。结缔组织病包括红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎、类风湿性关节炎、结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿、巨细胞动脉炎及干燥综合征等。在 70%RA患者

3、血清中出现各种类型的免疫复合物，尤其是活动期和 RF（+）患者1。SLE 活动期 CIC明显增高，甚至缓解期也常有升高，特别是狼疮性肾炎或血管炎，更可作为病情恶化的预兆2。85%干燥综合征患者的 CIC阳性。因此，CIC 的重要意义在于可作为病情、疗效观察指标。而目前检测 CIC的方法陈旧、费时，准确性、敏感性差。本研究采用了一种快速检测 CIC的方法，便于大批量的基础筛查及结果判读。 1 资料与方法 1.1 一般资料 采集本院 2014年 6月2015 年 1月已明确诊断为系统性红斑狼疮、类风湿关节炎及干燥综合征的患者血清（4020）岁，并采集来本院体检的健康人血清（4020）岁做为对照组。

4、 1.2 CIC的检测 应用 2.6%聚乙二醇 6000（PEG6000） ，PBS 配制检测试剂，上生化分析仪 AU640（OLYMPUS）在 450nm的吸光度下检测血清中的 CIC，比较标本组与对照组之间的 OD值。 1.3 统计学方法 应用独立样本 t检验分析 SLE、RA 及 SS患者与健康对照组的差异。 2 结果 2.1 血清 CIC的反应曲线 各分析 1例 SLE、RA 及 SS患者的反应曲线，发现在加入单试剂后第 3min（point 10）时反应基本上达到饱和，之后反应趋于平衡，如图 1所示。因此，本研究选择 point 10减去 point 0的 OD值作为结果。 2.2

5、各样本间血清 CIC的 OD值分析 比较 SLE、RA 及 SS患者与健康对照者的血清 CIC的 OD值，发现有统计学意义（P0.01） ，如图 2所示，从图 2也可以看出，SS 患者的血清 CIC水平明显高于 SLE及 RA患者。而SLE及 RA不同性别间比较无统计学意义，患者的人数分布如表 1所示。 3 讨论 本研究采用一种新的检测 CIC的方法，能区分 SLE、RA 及 SS患者与健康对照者的血清。而一项 WHO的研究分析了 18种检测 CIC的方法，仅发现六种方法能区分 RA患者与健康对照者的血清3。在这六种方法中，评价最高的检测方法是 C1qBA（C1q binding assay）

6、方法，但是另一研究表明此种方法检测到的 CIC是在体外形成的结果4。另外两种方法是单克隆类风湿因子结合抑制放射免疫分析法及人 Burkitts淋巴瘤细胞（Raji 细胞）测试法，前者受游离 RF的影响而不适于 RA患者，而后者受抗核抗体的影响，抗核抗体能与 Raji细胞结合，导致假阳性。另外三种方法也是建立在细胞相互作用的基础上，抗核抗体的存在会导致假阳性。因此，此种新方法能替代以上六种方法，进而可以商品化应用于快速检测血清 CIC。目前，本研究采集的血清标本还比较少，因此，还需采集大量的标本来分析 CIC与结缔组织病的相关性。 同时，本研究比较了 CIC与免疫球蛋白的关系，发现 CIC与免疫

7、球蛋白呈正相关，而检测免疫球蛋白的方法无法区分结合和游离的免疫球蛋白，因此还需应用其他方法区分是否是与抗原结合的免疫球蛋白。 CIC 含有许多不同的抗原，可反应疾病的状态。Kaname Ohyama5等发现 CIC相关的抗原成分凝血酶敏感蛋白-1 可做为诊断早期 RA的指标。因此，研究 CIC的抗原成分可有助于疾病的早期诊断，活动度及预后判断，本研究接下来拟应用该文章中的纳米液相质谱方法分析 CIC中的抗原成分与结缔组织病的关系。 参考文献： 1叶任高，陆再英，等.内科学M.第 5版.人民卫生出版社，2004. 2许德清，曾凡钦，等. 红斑狼疮M. 中国医药科技出版社，2003. 3Lambe

8、rt PH，Dixon FJ，Zubler RH，et al. A WHO collaborative study for the evaluation of eighteen methods for detecting immune complexes in serumJ.J Clin Lab Immun，1978，1：1-15. 4Peter Faaber，Truus P.M.Rijke Schilder，Peter J.A.Capel，et al.Circulating immune complexes and Rheumatoid ArthritisJ.J Rheumatol，1985，12：849-853. 5Kaname Ohyama， Yukitaka Ueki， Atsushi Kawakami， et al.Immune Complexome Analysis of Serum and Its Application in Screening for Immune Complex AntigensJ.Rheumatoid Arthritis，2011，57：905-909. 编辑/金昊天