优选心舒滴丸中最佳人参提取、精制工艺研究.doc

1、优选心舒滴丸中最佳人参提取、精制工艺研究摘 要目的 优选心舒滴丸中人参提取、精制工艺条件。方法 以人参皂苷 Rg1、Re 含量为指标，采用正交试验设计，优选人参提取工艺条件；以比吸附率、洗脱量为指标优选大孔吸附树脂精制工艺条件。结果 优选提取工艺条件：体积分数为 70%的乙醇 6 倍量，提取 3 次，每次1 h；精制纯化工艺条件：采用 AB8 型大孔吸附树脂，以体积分数为 70%的乙醇为洗脱溶剂，4 倍树脂体积。结论 优选工艺可较好的提取纯化人参皂苷有效成分。 关键词心舒滴丸；提取工艺；人参皂苷 Rg1；人参皂苷 Re；大孔吸附树脂 中图分类号：G112 文献标识码：A 文章编号：1009-9

2、14X（2015）25-0371-01 心舒滴丸由人参、丹参、冰片等药物组成，用于冠心病的治疗，人参为方中主药，人参皂苷为其主要活性成分之一，具有明显的扩张冠状动脉、增加心肌血流量、提高心肌耐缺氧能力、调节心律和血压等作用。本文采用高效液相色谱法，以人参皂苷 Rg1、Re 的含量为指标1，2，优选人参最佳提取工艺及大孔吸附树脂精制工艺条件，为生产提供依据。1 仪器与试药 DIONEX3000 高效液相色谱仪（在线脱气、自动进样、光电二极管阵列检测器、Chromeleon 色谱工作站，美国戴安公司） ；人参皂苷 Rg1 对照品（批号：110754-200320，供含量测定用） 、人参皂苷 Re

3、对照品（批号：110703-200322，供含量测定用）均由中国药品生物制品检定所提供；AB8 型大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂） 、HP20 型大孔吸附树脂（北京绿百叶科技发展有限公司） 、D101 型大孔吸附树脂（天津农药总厂） ；甲醇、乙腈（色谱纯，美国 TEDIA 公司） ；其它试剂为分析纯。 人参为五加科植物人参 PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，购自广州康尔健药业公司，符合中国药典2005 年版一部人参项下要求。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：DIONEXC18 色谱柱（250mm4.6mm，5m） ；流动相：乙腈0.05%磷酸（体积比 19.880.

4、2） ；检测波长：203nm；流速：1.0mL?min-1；在此条件下，供试品中人参皂苷 Rg1 与人参皂苷 Re 及其它组分峰能达到基线分离。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷 Rg1 对照品 0.01070g，置 10mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密称取人参皂苷 Re 对照品 0.01015g，置 10mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密量取人参皂苷 Rg1 对照品溶液2.5mL、人参皂苷 Re 对照品溶液 2mL，置 5mL 量瓶中，加甲醇至刻度，制成每 1mL 含人参皂苷 Rg10.535mg、人参皂苷 Re0.406mg 的溶液，作为对照品溶液。 2.3 标

5、准曲线的制备 分别精密吸取不同浓度的对照品溶液注入高效液相色谱仪中，以峰面积积分值为纵坐标（Y） ，以人参皂苷 Rg1 微克数为横坐标（X） ，计算回归方程 Y=262173X-692964，r=0.9997，表明人参皂苷 Rg1 在5.3553.5g 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。 以峰面积积分值为纵坐标（Y） ，以人参皂苷 Re 微克数为横坐标（X） ，计算回归方程 Y=214558X-731757，r=0.9998，表明人参皂苷 Re 在4.0640.6g 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.4 优选提取工艺 2.4.1 提取溶剂的选择 人参主要有效成分皂苷类溶于水及乙醇，

6、因此，可用水或乙醇为溶剂提取。首先分别以体积分数为 50%和 70%的乙醇、水为提取溶剂进行提取，结果显示以乙醇为溶剂时，人参皂苷 Rg1、Re 提取率较高。进而采用正交实验优选人参醇提工艺条件。 2.4.2 实验设计 以人参皂苷 Rg1、Re 为指标，采用 L9（34）正交实验设计对影响提取效率的因素进行考察。实验设计见表 1。 2.4.3 供试品溶液的制备 依照处方分别称取人参 20g，置圆底烧瓶中，按 L9（34）实验列号各条件回流提取，滤过，合并提取液，定容至 1000mL，作为样品溶液。精密吸取样品溶液各 100mL，水浴蒸干，残渣加水 25mL 使溶解，移置分液漏斗中，用水饱和正丁

7、醇提取 4 次，每次 20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤 2 次，每次 25mL，弃去氨试液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至 10mL 量瓶中，作为供试品溶液。 2.4.4 实验结果 精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re 的含量。结果见表 2、表 3。 由实验结果可知，因素 A、D 对人参提取效率有显著性影响，在以人参皂苷 Rg1、Re 为指标考察的四个因素中，依次排列为 DABC，较优的工艺应为 A2B3C2D3，即体积分数为 70%乙醇 6 倍量提取 3 次，每次 1h。 2.5 精制工艺考察 按处方称取人参

8、 1000g，按照优选提取工艺条件操作，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，作为样品溶液，备用。 2.5.1 吸附条件考察 分别量取处理好的 AB8 型、D101 型、HP20 型等大孔吸附树脂各10mL，平行两份，装柱，各精密量取样品溶液 200mL 通过树脂柱，以水洗至流出液近无色，收集流出液，定容，再以体积分数为 70%乙醇 100mL洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，定容，流出液分别取样，按照“2.4.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷 Rg1、Re 的含量。计算大孔吸附树脂比吸附量、洗脱率，结果显示AB8 型大孔吸附树脂对人参皂苷 Rg1、Re 的比吸附量和洗

9、脱率均高于其他树脂，分别为 4mg/mL 树脂和 98.3%，故选择 AB8 型大孔吸附树脂。 2.5.2 洗脱条件考察 2.5.2.1 洗脱溶剂浓度考察 精密量取样品溶液 90mL 通过 AB8 型大孔吸附树脂柱（10mL 树脂装柱，内径 1.5cm） ，树脂柱水洗至近无色，然后依次用体积分数为30%、50%、70%、90%乙醇各 20mL 洗脱，分别收集洗脱液，制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷 Rg1、Re 的含量。结果显示，体积分数为 70%乙醇的累计洗脱率已达 92.59%，故确定洗脱溶剂浓度为70%。 2.5.2.2 洗脱溶剂用量考察 精密量取处理后样品溶液通过树脂柱，

10、水洗至流出液近无色，量取体积分数为 70%乙醇 60mL 洗脱，分段收集洗脱液，制备供试品溶液，测定人参皂苷 Rg1、Re 的含量，结果显示 4 倍量树脂体积的洗脱溶剂洗脱率即可达到 95.72%，故确定洗脱溶剂用量为 4 倍树脂体积。 3 讨论 3.1 大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、节省费用等诸多优点，在对总皂苷的粗分离和除去水溶性色素、多糖和无机盐等杂质显示出其独特的效果。本文通过考察影响树脂吸附的因素，发现药液浓度对树脂的吸附有显著影响，如药液浓度过低则精制时间增加，效率降低；药液浓度过高则影响树脂的吸附，造成吸附量降低。 3.2 大孔吸附树脂可显著降低总固体得率，使活性成分高度富集，精制前提取液总固体得率为 20%，人参皂苷 Rg1、Re 含量为 5.10mg/g；大孔树脂精制后，其总固体得率为 1.5%，人参皂苷 Rg1、Re 含量为56.88mg/g，同时吸湿性降低，有利于制成现代剂型的中药，便于质量控制。 参考文献 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005 年版一部S.北京：化学工业出版社，2005. 2 蒋海强，何伟，李勇.参连降糖颗粒定性定量研究J.中南药学，2005，3（3）：173-175.