HPLC法测定罗氟司特片有关物质.doc

1、HPLC 法测定罗氟司特片有关物质摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定罗氟司特片有关物质的方法。方法 采用 Inertsil-C18（5？m，4.6*250mm）色谱柱，检测波长215nm，柱温为 30，流速为 1.0ml/min，进样量为 20l，流动相为乙腈-水（用稀磷酸调节 pH 值至 4.0） （48：52） 。结果 在该色谱条件下，罗氟司特与各杂质分离良好，辅料对有关物质检测无干扰。结论 该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。 关键词：罗氟司特片 有关物质 高效液相色谱法 罗氟司特用于慢性阻塞性肺炎（COPO）的治疗1。慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严

2、重的致残、致死性疾病，已造成沉重的社会经济负担，本品通过抑制 PDE4 减少炎症介质的释放，进而抑制如 COPD 和哮喘等呼吸道疾病对肺组织造成的伤害2-4。 目前国内对罗氟司特片有关物质的测定方法的报道尚不全面。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（HPLC）法5，参考有关文献6，7对罗氟司特片中有关物质进行了检测，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。 一、仪器与试药 1.仪器 岛津液相色谱仪（LC-10ATvp 泵，SPD-10Avp 紫外检测器，CBM-10Avp 系统控制器） 2.样品 罗氟司特对照品（山东方明药业集团股份有限公司自制，批号：S12

3、1214，含量：99.67%） ；罗氟司特片（山东方明药业集团股份有限公司，批号：130201、130202、130203，规格：0.5mg） ；罗氟司特杂质对照品、均为试剂，乙腈、磷酸为色谱纯；水为纯化水。 二、方法与结果 1.色谱条件 采用 Inertsil-C18（5m，4.6*250mm）色谱柱；检测波长 215nm，柱温为 30，流速为 1.0ml/min，进样量为 20l，流动相为乙腈-水（用稀磷酸调节 pH 值至 4.0） （48：52） 。 2.溶液的配制 2.1 系统适用性溶液的制备 取杂质（3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯甲醛）对照品和罗氟司特对照品各适量，加流动相溶解并

4、稀释制成每 1ml 中约含杂质0.3g 和罗氟司特 2.0g 的混合溶液，作为系统适用性溶液。 2.2 杂质对照品溶液 取杂质、对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每 1ml 中各约含杂质、2.0g 的溶液，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉适量（约相当于罗氟司特 20mg） ，精密称定，置 100ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 对照溶液的制备 精密量取供试品溶液 1ml，置 200ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 3.方法学考察 3.1 专属性考察 已知杂质专属性：经试验知空白辅料对已知杂质检测无干扰且各相邻已

5、知杂质峰的分离度均大于 1.5，专属性良好。 破坏性试验：供试品经酸、碱、氧化、高温、光照条件下的强制降解试验中，主成分峰与各杂质峰的分离度均大于 1.5，分离度良好。 3.2 线性范围 精密称取罗氟司特对照品约 10mg，置 100ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取 5ml，置 50ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备溶液。 精密量取贮备溶液 0.2 ml、0.6 ml、1.0 ml、1.4 ml、1.8ml，分别置 10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为线性关系溶液。 精密量取上述各溶液 20l，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：罗氟司

6、特片在定量限浓度至杂质限度的 120%浓度范围内，线性方程的相关系数为 0.9993（n=5） 。 4.系统精密度试验 取线性项下 0.53g/ml 的溶液，作为精密度测定溶液，取此溶液20l 注入液相色谱仪，连续进样六次，记录色谱图，试验结果表明：此系统的精密度良好。 5.准确度试验 杂质的回收率为 96.7%，杂质的回收率为 98.0%，杂质的回收率为 101.3%，杂质的回收率为 99.9%，杂质的回收率为 97.9%，杂质的回收率为 98.8%，方法准确度良好。 6.定量限 信噪比 S/N10 时，罗氟司特为 0.197ng；杂质为 0.013ng；杂质为 0.017ng；杂质为 0.

7、014ng；杂质为 0.019ng；杂质为0.017ng；杂质为 0.022ng。 7.检测限 信噪比 S/N3 时，罗氟司特为 0.0581ng；杂质为 0.0036ng；杂质为 0.0052ng；杂质为 0.0037ng；杂质为 0.0056ng；杂质为0.0054ng；杂质为 0.0073ng。 8.耐用性 微调流动相比例、流动相 pH 值、流速、检测波长及使用不同厂家色谱柱时，主峰与相邻杂质的分离度均大于 1.5，方法耐用性良好。 9.样品测定 按“2”项下方法配制供试品溶液、杂质对照品溶液、对照溶液，测定有关物质，结果三批样品中杂质、均未检出，总杂质分别为 0.26%、0.31%、0

8、.29%。 三、讨论 本实验对 HPLC 法测定罗氟司特片有关物质进行了方法学研究，结果表明该法用于测定罗氟司特片的有关物质，专属性强、灵敏度高、重复性好，结果准确可靠。 参考文献 1冯桂山，宋宁，段争，等.罗氟司特治疗慢性阻塞性肺疾病药理作用的临床研究现状J.临床荟萃，2011，26（4）：363-366. 2 韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择罗氟司特.世界临床药物.2011，32（7）：397-399. 3 马培奇.慢性阻塞性肺病治疗新药罗氟司特.上海医药.2011，32（4）：201-202. 4 封宇飞.磷酸二酯酶-4 抑制剂罗氟司特的药理与临床研究新进展.中国新药杂志.2011，20（14）：1257-1260. 5 国家药典委员会.中华人民共和国药典 2010 年版（二部）S.北京：中国医药科技出版社，2010：765-768. 6 何凤琴，周磊，秦妮等. 罗氟司特主药和有关物质的 HPLC 法测定J.医学美学美容，2013，3（3）：155-156. 7 赵海桥，苏贵勇，付建，刘存领.HPLC 法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质J.中国化工贸易，2013，5（7）：279-280.