液相色谱串联质谱法测定银杏提取物中主要银杏酸含量的方法研究【毕业设计】.doc

1、（20届）本科毕业设计液相色谱串联质谱法测定银杏提取物中主要银杏酸含量的方法研究DETERMINATIONOFGINKGOLICACIDINGINKGOBILOBAEXTRACTANDITSPRODUCTSBYLIQUIDCHROMATOGRAPHYTANDEMMASSSPECTROMETRY所在学院专业班级化学学生姓名学号指导教师职称完成日期年月I摘要【摘要】本论文综述了近年来银杏酸的检测方法，并对相关文献进行总结与评论的基础上，适当优化条件如选择合适的溶剂与色谱柱，在试验的基础上得到相对较好的液相色谱与质谱条件，从而撰写出来的。本文主要介绍高效液相色谱串联质谱法LCMS/MS分析检测银杏酸

2、含量。本方法以甲醇提取，经微孔膜过滤后直接进入LCMS/MS进样，测定方法较为简捷，且线性较好，回收率高。【关键词】银杏酸定量检测液相色谱串联质谱IIDETERMINATIONOFGINKGOLICACIDINGINKGOBILOBAEXTRACTANDITSPRODUCTSBYLIQUIDCHROMATOGRAPHYTANDEMMASSSPECTROMETRY【ABSTRACT】THISPAPERREVIEWSTHERECENTGINKGOACIDINTHEDETECTIONMETHOD,ANDSUMMARIZESANDREVIEWSTHELITERATURE,BASEDONTHESELEC

3、TEDOPTIMUMCONDITIONS,THEAPPROPRIATESOLVENTWITHTHECOLUMN,ASAPPROPRIATE,ONTHEBASISOFTHETESTRELATIVELYGOODPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYANDMSCONDITIONS,ANDTHUSWRITTENOUTTHISPAPERDESCRIBESHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYTANDEMMASSSPECTROMETRYDETECTIONOFGINKGOLICACIDTHEMETHANOLEXTRACTIONMETHOD,THEMIC

4、ROPOROUSMEMBRANEFILTERDIRECTLYINTOTHEHPLCINJECTION,THEMETHODISVERYSIMPLEANDGOODLINEARITY,HIGHRECOVERYRATE【KEYWORDS】GINKGOLICACID；QUANTITATIVEDETECTION；LCMS/MSIII目录1引言12实验部分421实验主要试剂和设备4211主要原料和试剂4212主要仪器设备522试剂的制备与保存5221标准液制备5222测试液的配制623仪器条件6231液相色谱（HPLC）测定条件6232API5000质谱条件6233液相色谱串联三重四级杆质谱测定73结果和讨

5、论931结果计算932精密度1033检测线性范围测试1334回收率试验134结论15参考文献1611引言11概况银杏（GINKGOBILOALL）为现存古代孑遗植物之一，又名白果树，为我国特产，资源拥有量占世界总量的70。银杏集药用、食用、材用、绿化美化环境于一体，被誉为东方的圣者，银杏叶制剂是目前在欧美和近邻日本最畅销的食用增补剂和药品。尤其医疗领域中，银杏是一种药用历史悠久的植物，以银杏黄酮和银杏内酯为主要成分的银杏叶制剂是目前国际上流行的治疗心脑血管疾病的天然有效药物成分，许多国家都致力于银杏叶制剂的开发与研制。然而银杏叶提取物（EGB）的化学成分中不仅包括银杏黄酮/内酯等主要有效成分，

6、还有银杏酸这一有害成分。银杏酸是国内外一致公认的潜在过敏物质，是自然界中最强烈的接触性过敏原中的成分之一，可引起严重的过敏反应，甚至还会引起基因突变、神经损伤等。银杏提取物（EGB）具有独特药理活性和巨大的临床应用价值，因此对银杏叶的药用、保健、化妆品等综合价值的深入挖掘和开发日益受到国内外的重视。EGB具有多种生理活性，目前国际上标准银杏叶提取物是按德国SCHWABE专利工艺生产的EGB761，其中黄酮含量为24，萜内酯为6，白果酸小于00005，原花青素类70，羧酸类成分130，儿茶素类20，非黄酮苷类20，高分子化合物40，无机物50，水分溶剂30，其他30。提取物的各种成分是一个整体中

7、有机的组成部分，EGB761的药理作用是各种相对固定组成的各组分共同作用的结果。目前比较公认的EGB的有效成分为黄酮类化合物和萜类内酯，而银杏酸的含量是银杏制剂质量标准中的一个主要控制指标。从银杏叶的化学成分来看，银杏叶的化学成分较为复杂；迄今为止，已从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物，其中主要为黄酮类化合物、萜类内酯，此外还有有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物及微量元素等。从文献来看，银杏酸（GINKGONEOLICACIDS）是银杏叶中含有的一类长链苯酚类化合物，为银杏的毒副作用成分。一方面，EGB及其制剂是目前国内外畅销的用于治疗心脑血管疾病和老年痴呆症的天然药物之一，但相关研究

8、表明其中所含的银杏酸具有致敏性、免疫毒性、细胞毒性等作用，是主要的有毒成分，银杏叶提取物及其制剂中必须限定其含量。其中银杏酸C130，C171，C151占总银杏酸的95以上。银杏酸C130分子式为C20H32O3，分子量3202，占总银杏酸的115；银杏酸C171分子式为C24H38O3分子量3743，占总银杏酸的385；银杏酸C151分子式为C22H34O3，分子量3463，占总银杏2酸的45；所以常说的银杏酸检测主要针对上诉三个物质进行检测。图11显示的就是上诉三种物质的结构式。德国卫生部规定银杏提取物EGB制剂中银杏酸的含量必须小于5UG/G。市面上竟然有人在EGB中利用芦丁等掺杂使假，

9、但现行质量标准又无法控制，这个问题如果不解决，终究会影响银杏叶制剂的功效，损害并断送我国的银杏叶产业。所以，真正全面控制EGB的质量迫在眉睫1。我国是银杏种植大国，也是银杏叶提取物生产和出口大国，因此，建立准确的银杏酸检测方法就显得尤为重要。银杏酸C130，GINKGOLICACIDC130银杏酸C151，GINKGOLICACIDC151银杏酸C171，GINKGOLICACIDC1713图11银杏酸的结构式12检测现状目前就银杏酸的检测没有规定的国家标准，但是相关文献报道不少。其中由于实验者不同，实验方法也竞相各异，归纳起来大致有以下几大类不同的方法。（1）高效液相法王志强，黄胜海，张琰曾

10、报道过利用AGILENT1100高效液相色谱仪，用SCCO2萃取和甲醇回流萃取银杏果外种皮中的银杏酸进行含量测定2。沈刚，姚渭溪报道过一种用改性的超临界二氧化碳萃取和离线的反相高效液相色谱分析银杏叶提取物中银杏酸含量的方法。以硅胶为载体，在30MPA、55条件下，8甲醇作改性剂时的超临界二氧化碳萃取，最小检测限为042MG/L4。仰榴青，吴向阳，陈钧还报道过反相高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸含量的方法，该方法以INERTSILODS2色谱柱，流动相为甲醇3HAC溶液928，V，V，流速10MLMIN，检测限52NG。但银杏外种皮提取物经硅胶柱层析预处理5。孔玉霞，李晨恺，王盼盼，宋金玉报

11、道了银杏酸含量的反相高效液相色谱测定方法。银杏酸在酸性盐溶液中，仅用正己烷萃取后的样品即可供HPLC分析，避免了多次浓缩过程。研究表明，此定量分析方法可用于银杏制剂中银杏酸含量的定量检测，最小检出量为041MG/L8。（2）紫外光度法吴向阳，仰榴青，陈钧在不同生长季节银杏叶中有毒成分银杏酸含量的测定中报道过银杏叶经正己烷处理后用紫外分光光度法测定银杏叶中有毒成分银杏酸含量的方法。该方法最低可测至572106，可用于银杏叶和银杏茶中有毒成分银杏酸的定量分析3。（3）液质联用法何静仁，谢笔钧用LC/ESI一MS对银杏叶提取物中银杏酸进行鉴定，并用反相银化HPLC研究4种银杏酸的分离和含量测定。在银

12、杏叶的乙醇浸提液中加酸性盐溶液和少量吸附剂后，用正己烷提取，浓缩后的残留物进行HPM分析。流动相为甲醇5乙酸9010,其中银离子浓度为003MOL/L。HPLC和二极管阵列检测联用对银杏酸色谱峰进行光谱分析和纯度鉴定9。陈学国，孔亮等报道过全二维液相色谱串联质谱分离分析模式，将质脂体色谱柱和ODS反相色谱柱作为二维分析色谱柱，二者通过一个连有两个05ML定量环的八通阀耦联。质脂体色谱柱上的馏分在反相色谱柱上分离后，直接进入紫外一检测器，然后经分流器分流后进4入大气压电离质谱方法来分析银杏叶提取物成分。不过该方法只给出了定性分析，并未给出定量分析结果6。吴向阳,仰榴青,陈钧等报道了银杏叶提取物及

13、其制剂经石油醚提取,提取液浓缩后用石油醚定容,HPLC直接测定,并用LC/MS对其中的银杏酸进行了定性鉴定。结果大致给出总银杏酸含量并未给出单一银杏酸含量710。KARINENDJOKO,JEANLUCWOLFENDER等曾用LCESIMS检测过银杏叶中银杏酸的含量，该方法需要经过氯仿等有机溶剂萃取，还要过硅胶柱等繁琐的前处理15。综上所诉，目前检测银杏酸的方法主要以HPLC法为主，高效液相法的技术较成熟，但大多测定结果均未能达到5PPM以下的标准。紫外分光光度法用于定量分析误差较大，准确度不高。液质联用技术处于起步阶段有待进一步确定及提高，从而满足相关国际限量标准。因此建立较为简洁步骤方法，

14、选择一种能较好提取该类化合物的溶剂，进行充分快速的净化、浓缩操作，并确保方法的回收率；色谱分离条件要能够满足化合物的残留分析要求，能对银杏提取物中银杏酸残留量情况进行检测。检测方法能满足兽药残留以及分析化学行业的分析要求，最低检测限达到国内外相关技术标准，符合出入境检验检疫药物残留控制限量要求。2实验部分21实验主要试剂和设备211主要原料和试剂主要原料见表21表21实验药品名称及规格来源序号名称纯度及规格试剂来源1甲醇色谱纯北京京科瑞达有限公司2乙酸色谱级国药集团化学试剂有限公司3银杏酸C13基准物99纯度日本FANCL株式会社4银杏酸C15基准物99纯度日本FANCL株式会社55银杏酸C1

15、7基准物99纯度日本FANCL株式会社6市售银杏叶提取物粉末散装宁波绿之健药业有限公司7纯净水GB/T6682规定的二级水自制212主要仪器设备表22仪器名称及厂商序号仪器名称仪器来源1CTC自动进样器瑞士CTC公司2安捷伦科技1200系列液相色谱仪美国安捷伦公司3API5000LC/MS/MS三重四级杆质谱仪APPLIEDBIOSYSTEMS45UMXDBC8液相色谱柱美国安捷伦公司6DIKMA进样瓶美国DIKMA科技7超声机清洗机250LH型KUDOS公司8称量纸上海劲马生物科技有限公司9250ML容量瓶江苏海门市敏磊玻璃仪器厂10045UM聚四氟乙烯微孔过滤膜美国DIKMA科技11AB1

16、04N电子分析天平（感量01MG）梅特勒托利多仪器上海公司12一次性注射器5ML浙江玉升医疗器械有限公司13超纯水器MILLIQ美国MILLIPORECO公司14THERMO移液器（100UL，200UL，1ML）美国THERMO赛默飞世尔22试剂的制备与保存221标准液制备1配制银杏酸混标溶液10UG/ML减量法称取银杏酸基准物适量，放入棕色的标准溶液瓶内，准确吸取当量甲醇后超声10MIN，暗处冷至室温后放入20的冰箱储存备用。62配制银杏酸混标溶液10UG/ML准确吸取1ML10UG/ML银杏酸混标溶液放入另一棕色的标准溶液瓶内，准确吸取9ML甲醇后，超声均匀3MIN，暗处冷至室温后放入2

17、0的冰箱储存备用。3配制01UG/ML的银杏酸混标溶液准确吸取10UG/ML的银杏酸混标溶液100UL，加入900UL甲醇后定容至1ML混匀。4分别配制20PPB，10PPB，5PPB，2PPB，1PPB，05PPB，01PPB，005PPB，001PPB标准溶液，该溶液临用时现配，有限期48H。222测试液的配制待测溶液配制减量法称取银杏叶提取物02000G，倒入250ML容量瓶中少量甲醇溶解后定容至刻度，超声30MIN，冷至室温，过微孔滤膜后直接放进CTC自动进样器载物盒里进样。23仪器条件231液相色谱（HPLC）测定条件根据实验结果的比较最终确定为以下条件为优化的实验参数值A色谱柱AG

18、ILENTXDBC8，5M，150MM46MM（内径），或相当者；B柱温25；C流动相甲醇2乙酸水溶液（955/VV）；D流速1200L/MIN（分流比37）；E进样量50L。232API5000质谱条件根据离子的性质及相关实验数据表明，以下质谱条件时所得数据较好A离子源ESI电离源；B扫描方式负离子扫描（）；C检测方式多反应离子监测（MULTIPLEREACTIONMONITORING，MRM）；D电喷雾电压（IONSPRAYVOLTAGE，IS）5250VE雾化气（NEBULIZERGAS；NEB）相对开放流量14ML/MIN；7F）气帘气（CURTAINGAS；CUR）相对开放流量7ML

19、/MIN；G离子源温度（TEMPERATURE，TEM）320；H）碰撞池出口电压/V（COLLISIONEXITPOTENTIAL，CXP）6V；I）选择离子驻留时间（DWELL50MSEC；J）碰撞池入口电压（ENTRANCEPOTENTIAL，EP）100V；K）碰撞气（COLLISIONGAS，CAD相对开放流量6ML/MIN；L）辅助气流压力（ACCESSORIALAIRFLOWPRESSURE）60PSI；M）去簇电压（DECLUSTERPOTENTIAL，DP）70V；N）焦环聚焦电压（FOCUSINGPOTENTIAL，FP）400V；O喷雾器放电针电流（NEBULIZERCU

20、RRENT，NC）2A；P其他仪器参数（DETECTORPARAMETERSPOSITIVE）DF2000V；CEM23000V。Q碰撞能量（COLLISIONENERGY,CE）；R）定性离子对、定量离子对、碰撞能量、色谱峰采集保留时间见表31。233液相色谱串联三重四级杆质谱测定2331定性测定被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物保留时间与标准物质保留时间偏差在25之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准物质中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。银杏酸各物质的定性质谱图如图25所示。

21、表24定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差以表示相对离子丰度（K）K5020K5010K20K10允许的最大偏差202530508银杏酸C130定性离子对质谱图银杏酸C151定性离子对质谱图银杏酸C171定性离子对质谱图图25银杏酸主要成分的多反应监测MRM定性离子对质谱图92332定量检测在仪器正常工作条件下，对混合标准工作液进样并用相应的标准工作曲线对样品进行定量。方法采用外标法定量。样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围则应适当稀释后再进行分析。各物质的MRM色谱图参见图26。图26银杏酸主要成分的多反应监测MRM定量离子对色谱图3结果和讨论31结果计算结果经色

22、谱质谱数据系统处理后系统按式（1）计算试样中被测组分的含量，计算结果需扣除空白值10001000CVXM1式中X试样中待测物含量，单位为微克每千克（G/KG）。C试样处理液中待测物浓度，单位为纳克每毫升（NG/ML）。10V定容体积，单位为毫升（ML）M试样质量，单位为克（G）。根据实验数据，得到相应的色谱峰保留时间，定量离子对，定性离子对及与之对应的碰撞能量如下。银杏酸主要成分的化合物中英文名称、色谱峰保留时间、定量离子对、定性离子对、碰撞能量，见表31。表31银杏酸主要成分中英文名称、定性离子对、定量离子对、碰撞能量、色谱峰保留时间化合物中文名称化合物英文名称色谱峰保留时间MIN提取离子对

23、M/Z碰撞能量V银杏酸C130GINKGOLICACIDC1305243192/27553192/10623551银杏酸C151GINKGOLICACIDC1515573454/30133454/10603255银杏酸C171GINKGOLICACIDC1717133733/32953733/1062356032精密度即在重复性条件下获得的两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的20。为了得到良好的精密度，我做了仪器相关条件的优化，优化后所得结果均能达到分析检测的要求。321流动相及流速条件优化根据相关文献及银杏酸的结构式，含有一个羧基，一个羟基，可以知道银杏酸能溶于酸类，醇类等极性溶剂中

24、，综合考虑成本及现有实验条件，选择乙酸和甲醇的混合溶液作为流动相。由于乙酸的浓度对色谱柱及仪器损害较大，因此不能单方面考虑效果而忽视仪器自身的承受能2的乙酸力。结合以上部分及常规经验，选择1的乙酸水溶液色谱级甲醇与2的乙酸色谱级甲醇为流动相，在分别观察所得到的色谱分离图。以2PPB浓度为测试浓度，分别在上诉两种流动相下测试，分别得到下图32与33所示。由图可知乙酸浓度的大小直接影响出峰时间及相应的峰型，1的乙酸水溶液时出峰时间推迟，峰型有拖尾，2的乙酸浓度时出峰时间较合适，在10分钟以内，且峰型比较尖锐，拖尾基本没有，在结合所得到的质谱图综合分析，最终确定以2的乙酸甲醇为流动相。11流速会很大

25、程度上影响出峰时间及峰型，根据分析化学中流速公式可知并非流速越大越好，而是在VCB时才是最佳流速，于是根据相关经验，分别测试了流速分别为08ML/MIN，12ML/MIN，20ML/MIN的试验，结果得到的数据显示当流动相为流速2的乙酸和甲醇以体积比955时，流速为12ML/MIN所得结果最好。相应图谱见图34与35。图321的乙酸水溶液甲醇为流动相的色谱图图332的乙酸水溶液甲醇为流动相的色谱图12图34未知浓度样品流速08ML/MIN质谱色谱图图35未知浓度样品流速为12ML/MIN质谱色谱图322精密度试验对待测的未知样品做日内与日间精密度试验，分别用减量法称取02000G银杏提取物试剂

26、，溶解后超声30MIN，冷却至室温后，用聚四氟乙烯膜过滤后直接上样，待仪器检测。结果如下表所示，由表可知该方法精密度较高，RSD均为超过3，说明在测定条件下，测定的准却度比较好。表36以银杏酸C17为参照做的精密度试验批次次数测试液浓度（PPB）平均浓度（PPB）RSD131118718232621810731791821177181721821131810633检测线性范围测试按照试验步骤，分别配制一系列浓度的银杏酸标准物的混合溶液001PPB、005PPB、01PPB、05PPB、1PPB、2PPB、5PPB、10PPB、20PPB，相同方法下进样检测，一银杏酸（C151为例得到如下表数据

27、。根据10001000CVXM计算出来，对应的样品浓度为银杏提取物中银杏酸浓度在555102NG/G119104NG/G。表37线性范围试验数据表标准物浓度（PPB）仪器检测出浓度（PPB）准确度（）0010N0050N010N0504448881105105223111555611121095195120N34回收率试验采用本方法对银杏提取物基质进行添加回收试验，不同添加浓度范围内得到的线性回归方程为银杏酸C130Y49E5X247E4，银杏酸（C151Y118E6X163E4，银杏酸C171Y769E5X101E5。R09998，变异系数三个都非常好。下图为相关线性方程14银杏酸C171银

28、杏酸C151银杏酸C13015图38银杏酸相应的线性方程35实际样品测试对样品测试所得质谱图如下，有定性离子对可知该方法能同时准确检测出三种银杏酸的含量来。图39实际样品质谱图4结论本文建立了银杏酸含量的高效液相色谱串联质谱的测定方法。银杏酸直接用色谱纯的甲醇提取溶解后，所得溶液可直接供HPLC分析，避免了多次浓缩过程。采用外标法定量分析，该分析方法具有更高的准确性。以银杏酸CL50为对照品，质谱检测。此方法具有较宽的线性范围宽，良好的线性关系R099，灵敏度高，最小检出量为555102NG/G，回收率为较高。研究表明，此定量分析方法可用于银杏制剂中银杏酸含量的检测分析。该方法简单易行，操作性

29、好，便于企业大规模检测分析。16参考文献1祝匡善,刘明警惕银杏叶制剂中的银杏酸含量N医药经济报,2007,200701192王志强,黄胜海,张琰不同工艺提取银杏外种皮中银杏酸及含量的测定J现代农业科技，2009（24）3263283吴向阳，仰榴青，陈钧不同生长季节银杏叶中有毒成分银杏酸含量的测定J分析检测，2002，23（12）94974沈刚，姚渭溪超临界流体萃取和高效液相色谱法测定银杏酸J分析化学研究简报，2000，28（8）9859885仰榴青，吴向阳，陈钧高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量J分析化学研究报告，2002,30（8）9019056陈学国，孔亮，盛亮洪，厉欣，邹汉法全二

30、维液相色谱串联质谱用于银杏叶提取物成分分析的研究J色谱，2005，23（1）46517吴向阳，仰榴青，陈钧高效液相色谱法测定银杏叶提取物及其制剂中银杏酸的含量J药学学报，2003，38（11）8468498孔玉霞，李晨恺，王盼盼，宋金玉银杏酸的定量分析方法研究J辽宁大学学报，2010，37（1）57609何静仁，谢笔钧银杏酸的反相银化高效液相色谱法分离和测定J药学学报，2001,36（8）60961210聂黎行，鲁静银杏叶提取物中总银杏酸的HPLC法限量检测J药物分析杂志，2005，25（8）90991111仰榴青,吴向阳,杨克迪,尹秀莲,陈钧银杏酸分析方法研究进展J药物分析杂质，2003,2

31、3（3）24124412蒋永红，王佩维,李五洲,曹礼群银杏叶提取物中银杏酸的分离与分析J日用化学工业，2002,32（3）666813王颖,盛龙生,楼凤昌,张正行,安登魁银杏总酸中有关成分的LC/DAD/API/MS分析J中国药科大学学报，2001,32（5）37137414魏秀莉,唐翠,印春华银杏叶提取物中银杏酸的HPLC测定J中国医药工业杂质，2003,34（6）29529615KARINENDJOKO,JEANLUCWOLFENDER,KURTHOSTETTMANNDETERMINATIONOFTRACEAMOUNTSOF17GINKGOLICACIDSINGINKGOBILOBALLE

32、AFEXTRACTSANDPHYTOPHARMACEUTICALSBYLIQUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYMASSSPECTROMETRYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYB,2000,74424925516NFUZZATI,RPACE,FVILLAASIMPLEHPLCUVMETHODFORTHEASSAYOFGINKGOLICACIDSINGINKGOBILOBAEXTRACTSJFITOTERAPIA,2003,7424725617DIRKLICHTBLAU,JOHNMBERGERANDKOJINAKANISHIEFFICIENTEXTRACTI

33、ONOFGINKGOLIDESANDBILOBALIDEFROMGINKGOBILOBALEAVESJNATPROD,2002,651501150418HONGJUNXIA,XIAODANWANG,LILI,SHENGJIAWANG,CHANGCHUANGUO,YAOLIU,LUSHANYU,HUIDIJIANG,SUZENGDEVELOPMENTOFHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY/ELECTROSPRAYIONIZATIONMASSSPECTROMETRYFORASSAYOFGINKGOLICACID151INRATPLASMAANDITSAPPLIC

34、ATIONTOPHARMACOKINETICSSTUDYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYB,2010,8782701270619王军，钱虹银杏酸分析方法的研究世界农药，2008,31（1）525420ECKHARDLEISTNERANDCHRISTELDREWKEGINKGOBILOBAANDGINKGOTOXINJJOURNALOFNATURALPRODUCTS,2010,731869221HISASHIKURIBARA,SUSANTWEINTRAUB,TATSUMIYOSHIHAMA,ANDYUJIMARUYAMAANANXIOLYTICLIKEEFFECTOFGINKGO

35、BILOBAEXTRACTANDITSCONSTITUENT,GINKGOLIDEA,INMICEJJOURNALOFNATURALPRODUCTS,2003,66（10）1333133722赵月珍,陈正收,徐瑾,周应军银杏酸的分离与银杏叶制剂中银杏酸的含量测定J中医药导报，2006,12（7）868823张洪国,李晖色谱技术在银杏酸分析中的研究应用J现代仪器，2003，3111324张小利，欧阳臻，杨克迪，陈钧银杏酸的分离制备及HPLC分析J中药材，2003，26（8）55755925倪学文,吴谋成,丁克熔反相高效液相色谱对银杏外种皮中银杏酚酸的分J华中农业大学学报2002，212166168