选择性培养基在矿泉水致病菌检测中的应用探析.doc

1、选择性培养基在矿泉水致病菌检测中的应用探析摘要： 目的：探析选择性培养基在矿泉水中粪链球菌、铜绿假单胞菌及产气荚膜梭菌等几大致病菌检测中的应用。方法：用滤膜法分别对致病菌进行选择性培养基及基础培养基培养，并对两组中培养 48h 后致病菌的菌落数进行比较，综合计算致病菌的生长率；着重探讨总结选择性培养基的抑菌效果。结果：矿泉水致病菌分别经过十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 B、SPS、Drakes19、TSC、KF 六种培养基培养，致病菌的生长率 90%的置信区间分别为（92.4%，116.7%） 、 （19.7%，25.9%） 、 （89.7%，111.8%） 、

2、（84.7%，102.6%） 、 （76.8%，98.6%） 、 （82.4%，107.8%） ；致病菌中的大肠埃希菌在各种选择性培养基中均受到良好的抑制。结论：十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、SPS、KF、TSC 等培养基具有较好的抑菌功用，可以将十六烷三甲基溴化铵琼脂系列培养基、SPS、Drakes19、TSC、KF 等几项培养基作为矿泉水致病菌检测指标，为提高矿泉水安全检测水平提供指导。 关键词：选择性培养基 致病菌 抑菌性 矿泉水 近年来，国家不断完善饮用天然矿泉水检测标准，GB/T 8538-2008已明确加检水中粪链球菌、铜绿假单细胞菌、产气荚膜梭菌、大肠菌群等指标。笔者着重就矿

3、泉水致病菌检测项目及其检测中选择性培养基的应用进行分析探讨，具体报告如下。 1、资料与方法 1.1 一般资料 1.1.1 实验菌株 本次实验研究所用的菌株包括粪链球菌ATCC29212、铜绿假单胞菌 ATCC15443、产气荚膜梭菌 ATCC13124、大肠埃希菌 ACTT25922 四种标准菌株，所有菌株均由广东省微生物研究所微生物检测技术研发中心提供。 1.1.2 选择性培养基 本次实验所用的选择性培养基主要包括十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基B、SPS（亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基） 、TSC（无卵黄-胰蛋白胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂培养基） 、K

4、F（粪链球菌琼脂培养基）及国产自制的 Drakes19 培养基六种培养基。其中后四种培养基均由北京陆桥科技有限公司提供，十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基系列由国外微生物科研公司提供。 1.1.3 其它设备及仪器 本次实验用到的仪器还包括美国 MILLIPORE的滤膜过滤器；另对照采用的基础性培养基有营养琼脂培养基、脑心浸萃琼脂培养基、品红亚硫酸钠培养基三种培养基，均由北京陆桥科技有限公司提供；实验用的稀释液为 0.85%的灭菌氯化钠溶液，蛋白胨水浓度规格为 0.1%且 PH 值为 7.0；此外，实验用的矿泉水取自各大超市。 1.2 方法 1.2.1 菌悬液的制备 将大肠埃希氏菌、粪链球菌与铜绿假单

5、细胞菌的标准菌株接种于营养琼脂中，并将其置于 35环境下进行时长为 20-24h 的复苏，选取接种复苏后的单菌落进一步接种于营养肉汤培养液中， 36培养 20-24 小时，制成菌悬液备用；另将产气荚膜梭菌株接种于疱肉培养液中， 36培养 20-24 小时，制成菌悬液备用。取菌悬液并利用比浊器制成活菌悬液（菌液浓度为 105-106cfu/ml） ，然后依次进行 10 倍稀释，制成浓度规格不同的细菌悬液。 1.2.2 粪链球菌检验 取三个适宜稀释度的粪链球菌悬液各 1ml，并将其制成模拟水样 250ml，将水样进行滤膜过滤，分别将滤膜放置于脑心浸萃琼脂培养基与 KF 琼脂培养基中进行对照培养，置

6、于温度为 361的环境下培养 48h，然后重复实验 8 次，进行菌落计数，并计算细菌在培养基中的生长率。 1.2.3 铜绿假单胞菌检验 同样取三个适宜稀释度的细菌悬液各1ml，制成模拟水样 250ml，并进行滤膜过滤，将滤膜分别置于十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、琼脂培养基 B、Drakes19 及营养琼脂对照培养基中，置于温度为 361的环境下培养 48h，然后进行菌落计数，并计算细菌在培养基中的生长率，为保证计算的准确性，要重复实验 8次。 1.2.4 产气荚膜梭菌检验 取三个适宜稀释度的产气荚膜梭菌悬液各1ml，稀释成 50ml 的模拟水样，并进行无菌滤膜过滤，将滤膜分别置于SPS（亚

7、硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂）培养基及 TSC 培养基中，并将其置于 361的厌氧环境中培养 24 小时，然后重复实验 8 次并计算菌落数量与细菌生长率。 1.2.5 抑菌实验 取三个适宜稀释度的大肠埃希菌悬液各 1ml，稀释成 50ml 的模拟水样，并进行无菌滤膜过滤，将滤膜置于倒好的选择性培养基平板上，后再选取同样三个稀释度的大肠埃希菌悬液进行过滤，将滤膜置于品红亚硫酸钠琼脂培养基平板上，在与细菌检验环境同样的温度环境下进行时长为 24-48h 的培养，然后计算菌落数与细菌生长率。 1.3 计算与统计处理 细菌检验及抑菌实验中计算细菌生长率的公式为：生长率=选择性培养基中的菌落数/对照组

8、培养基中的菌落数100%【2】 。计算出各类细菌的生长率后，用 SPSS16.0 统计软件进行数据处理，统计记录细菌生长率及其 90%的置信区间，用 t 检验并比照各类细菌在培养基中的生长率差异。 2、结果 2.1 粪链球菌于 KF 培养基中的生长率 粪链球菌于 KF 培养基与脑心浸萃琼脂培养基中的菌落数及其生长率详见表 1。 2.2 铜绿假单胞菌于选择性培养基中的生长率 铜绿假单胞菌于十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、B 中的细菌生长率置信区间分别为（92.4%，116.7%） 、 （19.7%，25.9%） ，其均值分别为 105.6%、22.7%；此外，铜绿假单胞菌于 Drakes19

9、培养基中的置信区间为（84.7%，102.6%） ，均值为 93.8%。 2.3 产气荚膜梭菌于 SPS 及 TSC 培养基中的生长率 产气荚膜梭菌在此两种选择性培养基中的生长率置信区间分别是（89.7%，111.8%） 、（76.8%，98.6%） ，均值为 100.5%、87.3%。 2.4 对非目标菌的抑菌效果 大肠埃希菌经过十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 A、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基 B、SPS、Drakes19、TSC、KF 六种培养基培养，48 小时后结果显示六种选择性培养基对于大肠埃希菌的抑菌效用均比较明显，抑菌性高达 100%。 3、讨论 矿泉水致病菌的培养基实验准确性要注重

10、培养基的质量控制。我国新制定的选择性培养基抑菌合格标准规定选择性培养基目标菌的生长率要大于 70%，即为合格。此次基于致病菌实验研究发现十六烷三甲基溴化铵琼脂系列培养基、SPS、Drakes19、TSC、KF 六种培养基的抑菌效果俱佳，此外，选择性培养基实验中发现十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基B 的细菌生长率较低，且同样的实验时间内其培养基中的菌落的生长率明显滞后，另外 SPS、TSC、KF 以其较高的置信区间，在致病菌株检验中应用价值较高。 参考文献： 1 孟凡亚，吴清平，蔡芷荷等.选择性培养基在矿泉水致病菌检测中的应用研究J.中国卫生检验杂志，2009，17（01）：26-28，52. 2 LI Jiqiu TAN Beiping MAI Kangsen.Isolation and Identification of a Bacterium from Marine Shrimp Digestive Tract：A New Degrader of Starch and ProteinJ.中国海洋大学学报：英文版，2011，10（3）：287-292.