动物细胞与组织培养.ppt

1、 动物细胞与组织培养, 动物细胞融合, 单克隆抗体制备, 细胞核移植技术和动物体克隆动物,动物细胞工程,(1) 动物细胞与组织培养,1、定义:,2、选材：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,动物细胞培养指在体外模拟动物体内环境，将动物细胞或组织在无菌，温度适宜和营养充分的条件下，使其继续生长，增殖并维持原有结构和功能的技术。,原因:细胞生命旺盛，分裂能力强.,肿瘤组织或细胞 正常组织或细胞,动物组织或细胞培养的难易程度,分化程度低的组织或细胞 分化程度高的组织或细胞,幼体组织或细胞 老龄组织或细胞,3、动物细胞培养条件：,(1)、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素 定期更换培养液 ）,防止培养

2、过程中污染 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害,(2)、培养基成分：种类：,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等,?,?,(3)、温度和PH 37 左右, 7.2-7.4(4)、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,和植物组织培养基相比有何独特之处？,液体培养基 、成分中有动物血清（补充合成培养基所缺乏的物质）等,4.动物细胞生长特性：,细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,5.过程：,原代培养：一般细胞繁殖1-10代，就发生接触抑制不在分

3、裂，这种培养就要原代培养。,传代培养：贴满瓶壁的细胞由于接触抑制不再分裂，需重新用胰蛋白酶处理，再分瓶培养让细胞继续增殖。,细胞株：原代细胞一般传至10代左右生长停止，大部分细胞衰老死亡，少数存活到4050代，这种传代细胞为细胞株，,细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶,10代细胞,原代培养,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,5.过程：,动物组织块,细胞悬液,原代培养,传代培养,胰蛋白酶处理,幼龄动物的器官组织；动物胚胎,动物细胞培养,1.胰蛋白酶的

4、作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？2.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？3.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,胰蛋白酶水解蛋白质,蛋白质,蛋白质和磷脂,能,注意时间的控制,不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近,问题与思考,5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养，使每个细胞与培养液接触,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐

5、受到抑制,4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？,7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。,将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。,这样的过程叫做传代培养,8、如何理解原代培养和传代培养？,9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？,10、有些为何能一直传下去？,在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养,不能,遗传物质发生改变，向癌细胞方向发展。,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,获得细胞或细胞产

6、物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物组织和动物细胞培养的比较,6、动物细胞培养应用,大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据,1、下列属于动物细胞工程中的工具是（ ） A限制性内切酶 BDNA连接酶 C胰蛋白酶 D果胶酶,C,2、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（ ）A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋

7、白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D培养至50代后继续传代的细胞是细胞株,B,3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养为胚状体。,A,4、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答,(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是_，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是_. (3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培

8、养基成分有_ _等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第 代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为_.,幼龄动物的器官、组织或动物胚胎,原代培养,10,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清,使每个细胞能与培养液接触,胰蛋白,剪碎,(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_处理，然后配置成_，再分装。(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是_。,细胞没有发生癌变,胰蛋白酶,细胞悬浮液,5某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）将数量相

9、等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_。（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是_ 。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用_。,多,补充合成培养基缺乏的物质,维持溶液的PH,（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长_。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用_消化处理。（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_。,停止,多,胰蛋白酶,抗生素,（5）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为AB两组，A组细胞培养液中加入_，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从AB两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在AB两组细胞中的_ _或_ _合成分子水平的差异，确定Y的药效。,Y,mRNA,蛋白质,