HPLC法测定盐酸西替利嗪口腔崩解片的有关物质.doc

1、HPLC 法测定盐酸西替利嗪口腔崩解片的有关物质摘 要：目的：建立 HPLC 法测定盐酸西替利嗪口腔崩解片有关物质的方法。方法：采用 Phenomenex Luna C18（2） （4.6250mm，5？m）色谱柱，以乙腈水（20：80） （用磷酸调节 pH 值至 1.8）为流动相 A，乙腈水（35：65） （用磷酸调节 pH 值至 1.8）为流动相 B；流速为1.0ml/min；检测波长为 230nm；柱温为 30。结果：该色谱条件下，盐酸西替利嗪与各杂质完全分离，辅料不干扰有关物质测定。结论：采用HPLC 法测定盐酸西替利嗪口腔崩解片的有关物质，方法简便，结果准确可靠。 关键词：盐酸西替利

2、嗪口腔崩解片 有关物质 高效液相色谱法 盐酸西替利嗪属于哌嗪类抗组胺药，是一种作用强而持久，选择性较高的 H1 受体阻断剂。能稳定肥大细胞，抑制组胺介导的早期变态反应，又能抑制炎症细胞移行及介质释放。本品无明显抗胆碱和抗 5-HT 的作用，中枢抑制作用较轻，不良反应轻微且作用较轻。用于季节性或常年性过敏性鼻炎、由过敏原引起的的荨麻疹及皮肤瘙痒，但其苦涩味较重。山东方明药业集团股份有限公司研制的口腔崩解片解决了常规加甜味剂与矫味剂掩味效果不理想的难题，亦避免了肝脏的首过效应。同时为提高其生物利用度、方便老人、吞咽困难及取水不便者等特殊人员服用并迅速达到起效目的开辟了新途径。依文献1我们建立了高效

3、液相色谱法（HPLC）对其有关物质进行测定，本方法准确可靠，可用于盐酸西替利嗪口腔崩解片的有关物质测定。 一、仪器与试药 岛津高效液相色谱仪（LC-20AT 泵，SPD-20A 紫外检测器） 。盐酸西替利嗪口腔崩解片（自制，规格 10mg，批号 130223，130224，130225） ；盐酸西替利嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号：10660-200401；） ，盐酸西替利嗪杂质 A：（RS）-1- （4 -氯苯基）苯甲基哌嗪；盐酸西替利嗪杂质 B：（RS）-2- 4 - （4-氯苯基）苯甲基 -1-哌嗪基乙酸；盐酸西替利嗪杂质 G： 2- 4- （RS）-（4-氯苯基）苯甲基 -1-

4、哌嗪基乙醇。乙腈为色谱纯；水为去离子水，其他试剂为分析纯。 二、方法与结果 1.色谱条件及系统适用性试验 用 Phenomenex Luna C18（2） （4.6mm250mm，5m）色谱柱；以乙腈-水（20：80） （用磷酸调节 pH 至 1.8）为流动相 A，以乙腈-水（35：65） （用磷酸调节 pH 至 1.8）为流动相 B，照下表 1 进行梯度洗脱；流速为 1.0ml/min；柱温为 30；检测波长为 230nm；进样量为 20l。 取盐酸西替利嗪、杂质 A、杂质 B 及杂质 G 对照品适量，加流动相 A溶解稀释制成每 1ml 含盐酸西替利嗪 1mg 及杂质 A、杂质 B、杂质 G

5、 各5g 的溶液，取 20l 进样，杂质 A、G、B、盐酸西替利嗪依次出峰，杂质 B 与盐酸西替利嗪的分离度应不小于 1.5。 2.溶液的配制 2.1 供试品溶液 取本品的细粉适量（约相当于盐酸西替利嗪 25mg） ，精密称定，置 25ml 量瓶中，加流动相 A 溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 2.2 对照溶液 精密量取供试品溶液 1ml，置 100ml 量瓶中，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，精密量取 2ml，置 10ml 量瓶中，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 杂质对照品溶液 取盐酸西替利嗪杂质 A、B、G 对照品适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml

6、 中各含 5g 的溶液，作为杂质对照品溶液。 2.4 辅料对照溶液 按处方称取辅料适量（约相当于盐酸西替利嗪25mg） ，精密称定，置 25ml 量瓶中，加流动相 A 溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 3.方法学考察 3.1 测定波长的选择 取盐酸西替利嗪适量加流动相 A 溶解制成每1ml 含 20g 的溶液。照紫外-可见分光光度法在 200400nm 范围内进行扫描，结果本品在 230nm 波长处有最大吸收，参考 BP2012 年版盐酸西替利嗪片标准1中测定波长为 230nm，确定本品的检测波长为 230nm。 3.2 专属性考察 3.2.1 辅料干扰试验 取 2.4 项下辅料溶液、2.

7、1 项下供试品溶液和2.3 项下杂质对照品溶液各 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图，结果辅料峰能与盐酸西替利嗪及各杂质峰完全分离，表明辅料不干扰有关物质测定。 3.2.2 破坏性试验 取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品在光照、氧化条件下容易降解，主峰与相邻杂质的分离度良好，本色谱条件对降解产物专属性良好。 3.3 线性范围 精密称取盐酸西替利嗪对照品 25mg，置 25ml 量瓶中，加流动相 A 溶解并稀释至刻度，作为贮备液，分别量取贮备液适量，用流动相 A 稀释成每 1ml 分别含0.205g、2.05g、3.075g、1

8、0.25g、15.375g 的溶液，分别量取 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=38278.8C+2819.2，r=0.99993（n=5） ，结果表明盐酸西替利嗪在0.20515.375g/ml 浓度范围内线性关系良好。 3.4 精密度试验 取“2.2”项下对照溶液，连续测定，峰面积的 RSD为 0.81%（n=6） 。 3.5 稳定性试验 照“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8 小时分别测定。结果供试品溶液在室温条件下放置 8 小时，总杂质的 RSD 为 5.6%，表明供试品溶液在室温条件

9、下放置 8 小时内稳定性良好。 3.6 检测限 取盐酸西替利嗪对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，取 20l 进样，使其主峰高约为噪音峰高的 3 倍，此时盐酸西替利嗪的进样浓度为 0.024g/ml，盐酸西替利嗪的检测限为 0.48ng。 3.7 耐用性 调整有关物质测试条件，分别考察流动相比例、流动相 pH 值、柱温变化、流速变化、检测波长变化及色谱柱变化时，测定结果的变化。在各条件下进样，供试品溶液杂质峰均能与主峰有效分离，故本色谱条件适合本品有关物质检查。 4.样品测定 按“2”项下方法配制各溶液，精密量取 20l，照“1”项下色谱条件，进行测定，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中扣除

10、辅料峰后，按主成分自身对照法计算有关物质，见表 2。 三、讨论 在建立色谱条件时，采用文献2，3中的方法，结果辅料对有关物质测定有干扰，采用 BP2012 年版盐酸西替利嗪片标准1，并作适当调整，结果盐酸西替利嗪与各杂质能完全分离，辅料对有关物质测定无干扰，本方法简单易行、灵敏度高、准确，可用于盐酸西替利嗪口腔崩解片的质量控制。 参考文献 1 British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2012.S. The Stationery Office，2012. 2 国家食品药品监督管理局.盐酸西替利嗪片进口药品注册标准（标准号：JX20050042）S.北京： 3 张理星，孙建合等.盐酸左西替利嗪口腔崩解片的含量及有关物质测定J.中国药业，2008，17（12）：47-48. 作者简介：付建，男，山东菏泽，助理工程师。