刺五加注射液质量标准草案.DOC

1、刺五加注射液质量标准草案刺五加注射液Ciwujia Zhusheye 本品为刺五加经提取加工制成的灭菌水溶液。【性状】 本品为橙黄色至棕黄色的澄明液体。【鉴别】 取本品 4ml（ 20ml 规格） 、7ml（100ml 规格）或 10ml（250ml规格） ，蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取刺五加对照药材2.5g，加乙醚 50ml，加热回流提取 1 小时，滤过，弃去醚液，残渣蒸干，加甲醇 30ml，加热回流 30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，通过D101 型大孔吸附树脂柱（内径 1cm，柱高 12cm） ，用水 100ml 洗脱，弃去水液，再用 70%

2、乙醇 100ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 2ml 使溶解，作为对照药材溶液。再取刺五加苷 E 对照品、紫丁香苷对照品、异嗪皮啶对照品，分别加甲醇制成每 1ml 含刺五加苷 E0.5mg、紫丁香苷 1mg、异嗪皮啶 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录B）试验，吸取上述供试品溶液 1l，对照药材溶液 2l，三种对照品溶液各 2l ，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（60：13：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，在与异嗪皮啶对照品色谱相应的位置上，显相

3、同颜色的荧光斑点；喷以 5%香草醛硫酸溶液，在 105加热至斑点显色清晰，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与刺五加苷 E 对照品及紫丁香苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】 pH 值 应为 4.56.0（中国药典 2010 年版一部附录 G ） 。颜色 精密量取本品 0.5ml（20ml 规格） 、1.0ml（100ml 规格）或1.5ml（250ml 规格） ，置 25ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取 10ml，置纳氏比色管中，与黄色 8 号标准比色液（中国药典 2010 年版一部附录 A 第一法）比较，不得更深。蛋白质 取本品 1ml，加新配制的

4、30%磺基水杨酸溶液 1ml，混匀，放置5 分钟，不得出现浑浊。鞣质 取本品 1ml，加稀醋酸 1 滴，再加明胶氯化钠试液（含明胶 1%、氯化钠 10%的水溶液，临用新配）45 滴，不得出现混浊和沉淀。树脂 取本品 5ml，加三氯甲烷 10ml 振摇提取，分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣加冰醋酸 2ml 使溶解，置具塞试管中，加水 3ml，混匀，放置 30分钟，不得出现沉淀。草酸盐、钾离子 取本品 2ml，依法测定（中国药典 2010 年版一部附录 S） ，应符合规定。总固体 精密量取本品 20ml（20ml 规格） ，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，在 105干燥 3 小时，移置干燥

5、器中，冷却 30 分钟，迅速精密称定重量，遗留残渣不得低于 2.5%（g/ml） 。渗透压摩尔浓度 取本品，依法测定（中国药典 2010 年版一部附录 F） ，规格为 100ml 和 250ml 的渗透压摩尔浓度应为 260320mOsmol/kg。热原 照热原检查法（中国药典 2010 年一部附录 A） ，剂量按家兔体重每 1kg 缓缓注射本品 7ml，应符合规定。异常毒性 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版一部附录 E） ，静脉注射给药，剂量按每只小鼠注射 0.5ml，应符合规定。过敏反应 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版一部附录 G） ，应符合规定。溶血与凝聚 取本品，

6、依法检查（中国药典2010 年版一部附录 H） ，应符合规定。其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（中国药典 2010 年版一部附录U） 。【指纹图谱】 照高效液相色谱法（中国药典 2010 年版一部附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基键合硅胶为填充剂（柱长为25cm，内径为 4.6mm，粒径为 5m） ；以乙腈-水（ 30：70）为流动相 A，以0.5%甲酸溶液为流动相 B，按下表的规定进行梯度洗脱；检测波长为 270nm；柱温为 20C；流速为每分钟 0.8ml。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于 12 000，且与 11、13 号峰的分离度应达到 1.5 以上。时间 (分钟

7、) 流动相 A (%) 流动相 B (%)015 012 100881521 1218 88822160 1869 82316065 100 0参照物溶液的制备 取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含 1.0mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品用 0.45m 的微孔滤膜滤过，即得。测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，记录 560 分钟的色谱图，即得。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于 0.88。对照指纹图谱峰 5：5-羟甲基糠醛 峰 12：紫丁香苷【含量测定】 总黄酮类物质对照品溶液

8、的制备 取芦丁对照品约10mg，精密称定，置 50ml量瓶中，加60%乙醇适量，置80水浴中加热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀；精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含芦丁0.1mg）。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置10ml量瓶中，各加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠溶液（1mol/L）4ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置10分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录附录 A），在510nm波长

9、处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法 精密量取本品适量，用30%乙醇制成每1ml约含总黄酮类物质0.3mg的溶液。精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“各加5% 亚硝酸钠溶液0.3ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（mg），计算，即得。本品含总黄酮类物质以芦丁（C 27H30O16）计，应为标示量的90.0%110.0%。紫丁香苷、刺五加苷 E 照高效液相色谱法（中国药典 2010 版附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 （1）在 UPLC 上分析；应用 ACQUITY UPLC BEH C18（2.

10、1100mm，1.7m）色谱柱；以乙腈为流动相 A，以 0.1%磷酸溶液（V/V）为流动相 B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为 40OC；流速为每分钟 0.3ml；检测波长为 220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30 000；刺五加苷 E 峰与相邻杂质峰的分离度应不小于 1.5。时间 （分钟） 流动相 A（% ） 流动相 B（ %）03.2 59.2 9590.83.210.0 9.222 90.87810.012.0 100 012.015.0 5 95（2）在 HPLC 上分析；以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 0.1%磷酸溶液为流动相 B，按下表中的规定进行梯

11、度洗脱；柱温为30OC；检测波长为 220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于 10 000；刺五加苷 E 峰与相邻杂质峰的分离度应不小于 1.5。时间 （分钟） 流动相 A（% ） 流动相 B（ %）020 1020 90802030 2025 80753040 40 604050 10 90对照品溶液的制备 取紫丁香苷对照品、刺五加苷 E 对照品适量，精密称定，分别加 50%甲醇制成每 1ml 各含紫丁香苷 40g、刺五加苷 E20g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 精密量取本品 1ml（20ml 规格） 、2ml（100ml 规格）或 3ml（250ml 规格） ，置 10ml 量瓶中

12、，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 2l（UPLC ）或10l（ HPLC） ，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每 1ml 含刺五加以紫丁香苷（C 17H24O9）计，规格（1）不得少于0.35mg、规格（2）不得少于 0.21mg、规格（3）不得少于 0.14mg；以刺五加苷E（C 34H46O18）计，规格（1）不得少于 0.17mg、规格（2）不得少于 0.10mg、规格（3）不得少于 0.07mg。【功能与主治】 平补肝肾，益精壮骨。用于肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作，脑动脉硬化，脑血栓形成，脑栓塞等。亦用于冠心病、心绞痛和并神经衰弱和更年期综合症等。【用法与用量】静脉滴注，20ml 规格一次 3 支5 支，一日 12 次，加入生理盐水或 510%葡萄糖注射液中； 100ml 规格一次 1 瓶，一日 12 次；250ml 规格一次 1 瓶，一日 1 2 次。【规格】 每支（1） 20ml（含总黄酮类物质100mg） 每瓶（2） 100ml（含总黄酮类物质300mg） 每瓶（3） 250ml（含总黄酮类物质500mg）。【贮藏】 密封，遮光，置阴凉处。