1、1毛细管气相色谱法测定雷替曲塞有机溶剂残留量摘 要：目的 建立气相色谱（GC）测定雷替曲塞中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺 3种有机残留量的测定方法。方法 采用直接进样毛细管气相色谱法，色谱柱为：DB-5 色谱柱（30m530 m1.0 m） 载气为氮气，FID 检测器，DMSO 为溶剂。结果：此色谱条件下被测物均能得到很好的分离，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回收率良好。结论：方法简便、灵敏，结果准确、可靠，适用于雷替曲塞中有机残留量的检测。 关键词：雷替曲塞 有机残留量 毛细管气相色谱法 雷替曲塞是一种胸腺合成酶抑制剂，属于一种喹唑啉叶酸盐类似物。在体内，雷替曲塞被细胞主动摄取后
2、很快被叶酸基聚合谷氨酸合成酶代谢为一系列聚谷氨酸，这些代谢物比雷替曲塞具有更强抑制胸腺合成酶作用，从而抑制细胞 DNA的合成，且能潴留在细胞内，长时间发挥抑制作用。在对结直肠癌的治疗中，疗效与氟尿嘧啶相似，但用雷替曲塞的副反应发生率低，方法简便，患者易于接受。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典 2010年版（附录）规定，该 3种有机溶剂均有残留限量。对于原药中 3种有机残留溶剂的色谱分析及残留量的测定尚未见文献报道。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了雷替曲塞原料药中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲
3、酰胺的残2留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。 一、仪器与试药 1.仪器 Agilent 7890A 2.试药 雷替曲塞原料药 3批 二、方法与结果 1.色谱条件 HP-5（30m530m1.0m）毛细管柱； 进样口温度为 200，检测器温度为 240。程序升温；初始温度 35，维持 5分钟，以每分钟 25升温至 220，维持 2分钟； 分流比： 10：1 ； 以 DMSO为溶剂，直接进样 1l。 2.供试品溶液与对照品溶液的制备 取雷替曲塞样品 0.1g，精密称定，用 DMSO1.0ml溶解，作为供试品溶液。 精密称取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各适量，加二甲基亚砜制成每 1ml中分
4、别约含甲醇 300g、二氯甲烷 60g、N，N-二甲基甲酰胺 88g 的混合溶液，作为对照品溶液。 3.系统适用性溶液 取 DMSO空白溶剂 1l 进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品溶液 1l 进行测定，记录色谱图，甲醇 tR4.6min，二氯甲烷tR6.3min，N，N-二甲基甲酰胺 tR8.4min。结果表明，各被测溶剂之间分离良好。 4.线性范围及标准曲线 取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺适量，精密称定，用 DMSO3稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述 3种被测物的线性范围（g/ml）依次是：30
5、.1361.2， 6.2174.5， 8.82105.8。回归方程及相关系数依次是： Y1 = 0.6037X1 - 1.9640，r1=0.9994； Y2 =0.4770X2 - 0.7893， r2=0.9995； Y3= 0.6289X3 - 0.0054， r3=0.9999。 5.精密度实验 在上述色谱条件下，取对照品溶液（每 1ml中含甲醇 300g，二氯甲烷 60g，N，N-二甲基甲酰胺 88g 的混合溶液） ，连续进样 6次，计算对照品溶液中被测溶剂的 RSD依次为 2.34% ，2.25%，2.53%。 6.最低检测限 取对照品溶液用 DMSO逐步稀释，依据 S/N3，确定
6、甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的最低检测限依次是 2.0，1.2，1.5。 7.回收率实验 取甲醇约 0.30g，二氯甲烷约 0.06g，N，N-二甲基甲酰胺约0.088g，精密称定，置已加少许 DMSO的 10ml容量瓶中，加 DMSO至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置 10ml容量瓶中，加 DMSO至刻度，摇匀，即得每 1ml中含甲醇约 3000g，二氯甲烷约 600g，N，N-二甲基甲酰胺约 880g 的混合溶液。 溶液 1： 精密移取混合溶液 0.8ml，置 10ml容量瓶中，加 DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的 80%溶液。 4溶液 2： 精密移取混合溶液 1.0m
7、l，置 10ml容量瓶中，加 DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的 100%溶液。 溶液 3： 精密移取混合溶液 1.2ml，置 10ml容量瓶中，加 DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的 120%溶液。 取相同批次的雷替曲塞约 0.1g，精密称定，平行 9份，分别移取溶液 1、溶液 2和溶液 3各 1.0ml溶解，每 3份加一种溶液，分别摇匀，即得 9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为：98.8%，97.0%，97.8%，RSD 在 2.17%3.27%之间。 8.供试品的测定 照 2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定， 3批原料药中检测出甲醇分别为 0.012%，0.011%，0.012%，其他溶剂未检出。 三、讨论 本方法简便，灵敏，精密度，回收率符合中国药典 2010年版的要求，因此本色谱方法适用于雷替曲塞有机溶剂残留量的检测。 参考文献 1徐红，杨钊，谢宜名，李新荣 气相色谱法测定美洛昔康中的 3种残留溶剂药物分析杂质2013.33（6）. 2中国药典 2010 二部附录.
