食源性疾实验室检测技术要点.ppt

1、食源性疾病实验室检测技术要点,温州市CDC微生物检验科 李毅,前言,食物中毒应急处理与现场调查,现场调查中的实验室支持,概念与分类,前言,食品安全事故流行病学调查工作规范 卫监督发201186号 本规范自2012年1月1日起施行,食品安全事故流行病学调查工作规范,主要内容包括1 、总则2 、调查机构管理3 、调查内容和程序 5部分主要内容和总共23条4 、调查结论和报告5 、附则,第三条 事故流行病学调查包括人群流行病学调查、危害因素调查和实验室检验，具体调查技术应当遵循流行病学调查相关技术指南。第六条 事故流行病学调查实行调查员制度。各级调查机构应当根据工作需要配备事故流行病学调查员。 调查

2、员应当由具有1年以上流行病学调查工作经验的卫生相关专业人员担任。经专业培训考核合格后，由同级卫生行政部门聘任。,食品安全事故流行病学调查工作规范,食品安全事故流行病学调查工作规范,第九条 事故流行病学调查由调查机构成立的事故流行病学调查组（以下简称调查组）具体实施。调查组应当由3名以上调查员组成，并指定1名负责人。第十一条 开展人群流行病学调查应当包括以下内容： （一）制订病例定义，开展病例搜索；（二）统一个案调查方法，开展个案调查；（三）采集有关标本和样品；（四）描述发病人群、发病时间和发病地区分布特征；（五）初步判断事故可疑致病因素、可疑餐次和可疑食品；（六）根据调查需要，开展病例对照研究

3、或队列研究。,食品安全事故流行病学调查工作规范,第十二条 开展危害因素调查应当包括以下内容：（一）访谈相关人员，查阅有关资料，获取就餐环境、可疑食品、配方、加工工艺流程、生产经营过程危害因素控制、生产经营记录、从业人员健康状况等信息（二）现场调查可疑食品的原料、生产加工、储存、运输、销售、食用等过程中的相关危害因素；（三）采集可疑食品、原料、半成品、环境样品等，以及相关从业人员生物标本。,食品安全事故流行病学调查工作规范,第十三条 送检标本和样品应当由调查员提供检验项目和样品相关信息，由具备检验能力的技术机构检验。标本和样品应当尽可能在采集后24小时内进行检验。 实验室应当妥善保存标本和样品，

4、并按照规定期限留样。,(一)概念,食源性疾病 指通过摄食而进入人体的有毒有害物质（包括生物性病原体）等致病因子所造成的疾病。一般可分为感染性和中毒性，包括常见的食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、寄生虫病以及化学性有毒有害物质所引起的疾病。 （WHO）食物中毒 指食用了被有毒有害物质污染或含有有毒有害物质的食品后出现的急性、亚急性疾病； 食源性疾病有暴发和散发两种形式，食物中毒是食源性疾病的暴发形式,食品安全事故,指食物中毒、食源性疾病、食品污染等源于食品，对人体健康有危害或者可能有危害的事故。,食源性疾病的分类,食物中毒（急性）食源性肠道传染病食源性寄生虫病变态反应性疾病（食物过敏）暴饮暴

5、食引起的急性胃肠炎等一次大量或长期低剂量摄入某些有毒、有害物质引起的以慢性毒害为主要特征的疾病，食物营养不平衡所造成的某些慢性疾病等,概述,食物中毒应急处理与现场调查,为了及时准确掌握食物中毒发生原因，积极采取有效防范措施，在食物 中毒调查时，要按照一定程序开展工作。 食物中毒事故处理办法 卫生部1999 突发公共卫生事件应急条例 国务院2003年5月7日 食品安全法 2009年2月28日中华人民共和国食品安全法实施条例 食品安全事故流行病学调查工作规范 2011年,相关法律法规,食物中毒应急处理组织与职责,食物中毒应急处理涉及 卫生行政部门 卫生监督机构 疾病预防控制机构 医疗救治机构 其他

6、有关部门,食物中毒报告、信息管理制度,1.食物中毒一般报告制度2.食物中毒紧急报告制度（1）中毒人数超过30人的应当于6小时内报告同级人民政府和上级人民政府卫生行政部门；（2）中毒人数超过100人或者死亡1人以上的，应当于6小时内上报卫生部，并同时报告同级人民政府和上级人民政府卫生行政部门；（3）中毒事故发生在学校、地区性或全国性重要活动期间的应当于6小时内上报卫生部，并同时报告同级人民政府和上级人民政府卫生行政部门；（4）其它需要实施紧急报告制度的食物中毒事故。,食物中毒应急处理准备,一、应急处理准备原则要求“预防为主、常备不懈” 二、重大食物中毒应急处理准备与支援（一）食物中毒监测与预警（

7、二）资金储备（三）食物中毒物资准备三、食物中毒应急处理演练四、预防和控制食物中毒的宣传和公众教育,食物中毒应急物资准备,1.食物中毒事故应急处理专用车辆：配备救护顶灯、车载电话、储物小冰箱、打印传真机等。2.采样用物品 （食品、现场涂抹样品、便样、患者呕吐物、血样等） 3.音像取证工具：录音机（笔）、照相机、摄像机各1部。4.现场快速检验、测量设备：食物中毒快速检样箱，食品温度测试计、消毒剂浓度检测试纸等。5.法律文书：食物中毒事故个案调查登记表、现场卫生监督笔录、现场检查笔录、调查笔录、样品采集记录表、采样记录、样品送检单、先行登记保存证物通知书及存根、卫生监督意见书、责令改正通知书、卫生行

8、政控制决定书、封条、送达回执等。6.参考资料：食物中毒诊断标准、有关卫生部规章、参考书籍等。7.其它有关物品：如便携式电脑、手机或对讲机等通讯设施以及用于保存运送培养基的冰箱、冰块等,病因初步判断,症状体征 微生物食物中毒大多为急性胃肠炎症状。如霍乱弧菌中毒表现为呕吐、泻水、脱水、体温下降等；沙门菌、志贺菌中毒表现为腹痛、腹泻、发热等；变形杆菌中毒以上腹部刀绞样疼痛及急性胃肠炎症状为主；葡萄球菌肠毒素引起胃肠炎，神经系统症状（肉毒毒素、真菌毒素、化学毒物）；呼吸道症状（链球菌等）；甲醇中毒主要表现为视觉障碍、复视、失明；亚硝酸盐中毒主要表现为缺氧症状，呼吸浅表、窒息；毒鼠强、氟乙酰胺主要表现为

9、恶心、头痛、痉挛、肌肉震颤、流涎、大小便失禁等；有机磷中毒主要表现为毒蕈碱样和烟碱样中毒症状；氰化物中毒主要表现为闪电样击倒，迅速死亡；安眠镇静药、一氧化碳、吗啡中毒主要表现为昏睡，等等。,病因初步判断,潜伏期 平均潜伏期意义：是确诊标准之一；用于估计事故发生发展态势；决定调查起点餐次；确定采取防治措施的时间范围，并考核防治措施效果。,病因初步判断,4类食物中毒的潜伏期一般是： 5 L 液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200ml 固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200g 呕吐物 致病菌或毒物分析 50g(ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 200ml 腹泻物 致病菌或毒物分析 50g(m

10、l) 血液 病原分离、抗体分析 5ml 脑脊液 病原分离 2ml 皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取,采多少,所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样),采什么样,对 照内对照外对照,暴发性食源性疾病,多途径传播疾病（大肠杆菌O157:H7 ）潜伏期长的疾病（伤寒、李斯特菌等）非消化道症状的疾病水源性传播疾病,需注意,什么时间采,采样时间氟乙酰胺在体内数小时后就开始转化为氟乙酸，血中在十余小时或数天后就检不出了氟乙酰胺，这个阶段体内氟乙酸浓度仍较高，所以应该采集患者的血样或尿样来检测氟乙酸；毒鼠强在体内代谢缓慢，中毒后数月后采集的血样对病

11、因确定仍有重要价值。血清：如怀疑是沙门菌、变形杆菌、致泻大肠艾希菌食物中毒时，应分别在患者急性期（3天以内）和恢复期（2周左右）各采取血液23毫升，待凝固时分离血清，做抗体滴度测定。如做血液细菌培养时，应将采取的血液直接注入含有玻璃株的无菌小烧瓶中进行振摇，然后加入相应培养基或直接将血液注入培养基中。如怀疑副溶血性弧菌食物中毒时，应分别在患者中毒12天和1周时采取血液做抗体滴度测定。（因1周后抗体就降低或消失）。病毒分离标本最好在发病初期（1-2天）采,样 品 采 集,怎么采,不同检验目的的样品细菌分离 病毒分离抗原-抗体检测化学毒物检测无菌部位基因检测木制的棉拭子 ？,食物中毒事件怎么采,

12、粪便可直接采取或采便管插入直肠采集；呕吐物可注入灭菌试管内，由于胃酸能使样品为酸性，不利于细菌的存活，所以应在采集的呕吐物内加入10苏打予以中和，以保持细菌的活性。咽喉涂抹样可用棉签涂擦咽喉部采取洗胃液直接抽取注入灭菌容器内。血液血样的采集应尽早抽取患者的血液，在中毒患者急性期必要时可作血样培养，但主要是用来检测患者血液中的抗体。一般需采血二次以上，第一次在发病初期(3天以内)，第二次是在恢复期(2周左右)，若患者血中抗体呈明显上升趋势，即可证实其受到过相应致病菌的感染。方法是从肘静脉采取血液23ml，注入干热灭菌试管内，使成斜面，待凝固后，分出血清送检。如做血液细菌培养，可直接注入灭菌并带有

13、玻璃珠的三角瓶中，立即振摇数分钟，以防凝固，然后送检。,食物中毒事件怎么采,(3)对可疑中毒患者在解剖前不要将尸体用福尔马林、酒精等化学物处理，解剖台要冲洗干净，所用的解剖器具、手套要预先冲洗干净、晾干备用，不要沾染消毒药液（如来苏、酒精、升汞溶液等）以免污染了检材。例如在解剖时使用了升汞溶液浸泡过的手套，手套上的升汞就可能对样本污染，会干扰了病因的判定。在尸体周围不要喷洒农药灭蚊蝇，以免污染可能用于毒物分析的检材。尸体解剖检样可采取胃肠内容物、脏器、肠系膜淋巴结及血液等。内容物用灭菌注射器或灭菌器械采取，置入灭菌瓶内；脏器应先用烙铁烧灼消毒表面，再用解剖刀剪和镊子取内部检样1020克，置于灭

14、菌容器内送检。血液及体液用灭菌注射器直接抽取或用灭菌棉签蘸取。对死亡患者一般从心腔内采集血液，也可采集腋下静脉、颈静脉、股静脉血液，心腔内血液和周围血中毒物浓度不同。,食物中毒事件怎么采,疑为百草枯中毒患者的血液不能用玻璃试管，因为玻璃可以使百草枯钝化，钝化后的百草枯实验室是不能检出的。疑为一氧化碳中毒者应尽早抽血5-15毫升注入玻璃试管内，量要直装至瓶口，必须用密封玻璃塞塞紧，避免瓶中残留空气，血液是分析一氧化碳中毒的唯一检体。其他易挥发毒物样本也要尽量密封保存，尽快检测。如氰化物。,怎么采,样品采集程序 采样用物品准备 采样程序方法 采样纪录 样品编号 样品保存,使用卫生部统一制定的采样记

15、录文书，经有关责任人员签字后送检；,注意,样 品 采 集,影响采样的主要因素,缺乏及时性： 由于一些消费者对食品安全法观念淡薄，缺乏自我保护意识，食源性疾病发生后他们不是首先及时向相关部门报告疫情，而是自己先与经营者交涉，在不能如愿的情况下才向卫生监督部门举报，因此造成一是经营者在得知发生食源性疾病的情况后，首先处理掉一切可疑剩余食品，对加工经营现场、工具、容器作了相应的处理；二是延误了报告的时间，从而影响了对可疑食品和病人排泄物的采集。采样缺乏代表性： 由于食源性疾病多是突发性的，如细菌性食物中毒都有特定的潜伏期，最短1h 3h，一般5h 10h ，但当相关部门接到疫情到达现场后，往往时间周

16、期间隔较长，可疑食物已清理，即使采到几份剩余食物，也可能不是当日餐桌上剩余菜肴，因此，常常出现食品中检出的细菌与病人排泄物中检出的细菌不相符，影响了结果的分析。,影响采样的主要因素,食品加工制作现场各环节的采样往往能提供一些线索，但常常见到现场已被清扫，食具和用具已清洗干净，同样也影响了食品加工工具、容器、场所的采样和检验。采样缺乏典型性：中毒病人发病后，患者一般开始时自行用抗菌毒，严重时才去当地医院治疗，由于一些医务人员对食源性疾病报告制度意识不强，导致了只管用药治疗，忽视了对病人呕吐物和排泄物的留取，大量的抗菌素抑制了致病菌繁殖，从而影响了致病菌的检出率。采样缺乏完整性：一般中毒病人发病期

17、的血液能采集到，但是采集恢复期的血液，由于病人的不配合或外出经常采不全也影响了检验结果的全面分析。,样品的处理,(1)固体食物如系大块鱼肉、组织脏器等，先用烙铁烧灼表面，或在沸水中烫35秒钟，然后再取内部检样510克，按无菌要求，剪碎后置无菌乳钵内，加人适量灭菌海沙研细，再加人无菌生理盐水作1：5稀释，混匀沉淀后，取上清液进行接种和涂片染色镜检。(2)液体食物可将液体食物直接接种培养基，或离心(每分钟3000转以上)半小时后，采取沉淀物进行细菌培养。(3)罐头食品如罐头尚未打开，先用温水洗净表面，并以95酒精燃烧消毒，然后用灭菌开口刀将罐头打开，以无菌操作将检样取出进行细菌检验。如罐头为空盒，

18、可用肉汤培养基冲洗盒内壁，以洗液做细菌培养。,样品的处理,(4)粪便和呕吐物以无菌生理盐水，充分搅拌混匀、静置，待其中粗块下沉后，取上清液进行接种及涂片染色镜检。(5)洗胃液用无菌试管低速离心后，取沉淀物进行检验。(6)血液检样用做细菌培养的抗凝血，以灭菌吸管吸取，注人肉汤或其他培养基内增菌。用于测定患者血清效价的血样，可用离心沉淀法或自然析出法将血清分出，与可疑中毒菌株作试管凝集试验。(7)炊事用具擦洗水等可直接接种培养基。,样本标签内容,样本编号唯一性样本来源从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝脏就可标 注为某某患者肝脏；样本数量包装中样本的数量，如此包装中同时采集了2块肝脏样本 就要

19、标注为2 采样时间：采样地点：采样人：样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品）,样本标签内容,最小包装（每个标本） 每个包装箱 每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。,样品的包装,感染性样本 放射性样本 易腐性样本 挥发性样本,样品的运送,标本应由专业人员专人运送，最好使用专车。邮寄样品除患者检测血浆外，其他样本不宜通过邮寄方式转运。检测血浆用带盖的小塑料管盛装，外衬缓冲包装和吸附材料，通过EMS邮寄。在送邮件时要明确向邮局说明邮寄物品的成分及安全性。在运送过程中，要保证条件能够持续保障。,样品的保存容器、介质、温度,检测目的 细菌 病毒 寄生虫

20、 抗原抗体 核酸 化学毒物预期保存时间,样品的保存运送,安全性 样品的安全 环境的安全（不泄漏、不污染）交接手续,样品送检注意事项,1）采集的样品一般应在4小时内接种完毕，故必须及时送检。2）夏季送检样品时，应注意冷藏。不得加入任何防腐剂。3）应附详细送检单，应填明样品名称、份数、重量、来源、中毒表现、送检时间、有范围的检验项目、采样条件（容器是否灭菌、有无封条）、送样人。4）样品必须有牢固的标签，包装严密封闭。5）注意无菌操作，防止污染，以免影响结果。6）采样过程中履行必要的采样手术。（发生中毒单位负责人签封与开具收据等）7）采集肛拭人数，中毒事件规模较小，患者人数10人以下的，全部采样；中

21、毒事件规模较大，患者人数较多，至少应对30%-50%临床症状典型的患者进行采集。,检 验,检什么,实验项目要结合现场流行病学调查.临床.血检.电生理.影像学检查等结果。确定实验项目应同时考虑以下几点: 早期IgM和双份IgG血清学检验； 排泄物.分泌物.血液中的病原体的形态学.血清学和核酸分型鉴定。 人体外环境病原鉴定结果与人体内抗原、抗体的吻合、匹配； 毒力分析和动物实验模型佐证； 病原侵入与发病的时间顺序； 主导病原与併发病原的甄别;, 安排检验项目要有几套预备方案,实验的无果和失败。,检什么,病原分离 细菌需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、L型菌 病毒 寄生虫血清学检查： 抗原 抗体 急性期I

22、gM抗体 急性期和恢复期双份静脉血测定特异性IgG抗体。核酸检测 特征基因、毒力基因、溯源比较定性/定量,细菌性食物中毒的实验室诊断,致病菌的定量检验对细菌性食物中毒的调查 需要做定量检验的细菌（食物中毒与摄入量有关）产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌、变形杆菌 样品：中毒相关食品、粪便、呕吐物收集致病菌对人的最低感染剂量的资料危险性分析中对暴露量的评估摄入的菌量与产生有害健康作用的概率和程度成正相关，但通常不是呈线性关系。摄入菌量的增加通常降低肠道疾病的潜伏期。,怎么检,灵敏度、准确度、重现性、不同方法结果的可比较性用什么标本用什么方法用什么试剂,对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检

23、验资质的实验室同步开展工作，避免因实验室管理和技术因素对结果的影响。,检测项目和方法的确定,分析方法的选用要考虑待测样品（原形、代谢物）、分析要求（定性、定量）、样品类型、实验室条件，分析目的等因素，还要考虑时效性、准确性、经济性等要求。有时毒物有定性结果即可说明问题，而对于那些有环境或内源性本底的毒物，或需用于现场评价、应急处理方法选择或用于患者治疗效果评价的要用定量分析。临床治疗药物监测必须进行定量分析。,食品安全国家标准食品微生物学国家检验的演变,怎么检,快速灵敏方法的应用仪器自动化方法分离培养方法的改进,快速灵敏方法的应用,1.细菌培养的前、后处理方法的自动化 培养法的前处理包括采样、

24、称量、分样、匀浆、制作琼脂培养基、样品与培养基混释等。这些操作自动化仪器有：自动称量分注装置、均化器、培养基制作装置、菌液自动涂抹装置等。培养后，进行菌落计数的自动化装置有：笔型手动式计数器、用图像将平板内菌落摄录下来的自动计数仪、彩色图像菌种鉴定仪。,快速灵敏方法的应用,各种简易培养基：简易培养基是食品微生物检验中应用较为普遍的一种快速简便的方法。培养基有印花型、平板型、滤膜型等多种类型。例如，日本几家公司生产的含有酶显色底物的印花型培养基，由于有酶显色底物，因而有快速易判断等特点。液体样品检测用培养基有多种形式，有的在孔板上固定有无菌液体培养基，检测时只要注入液体样品即可判断结果；颗粒状培

25、养基加入液体样品培养即可判断结果；而干燥型培养基是将培养基成分和胶体化物质涂布在培养基垫上，它便于携带，操作简便。,快速灵敏方法的应用,快速灵敏方法的应用,检测活菌数方法与器材 不需进行培养即可直接检测活菌数的方法有：观察细菌引起电流阻抗值变化的阻抗测定法；以细胞内ATP为指标的生物发光法；用荧光剂标记微生物细胞测定发光量的荧光染色法；用滤膜集菌，用ATP发光试剂标记，然后进行测定的滤膜光子检测法等。这些方法是直接检测活菌数，因而适于观察细菌随时问发生的变化，可用于发酵食品的质量管理、饮料生产工艺的监测等。,快速灵敏方法的应用,高选择性显色培养基,食物中毒致病菌简易快速的检测方法与器材,沙门氏

26、菌、O157大肠菌、李斯特菌等食物中毒致病菌如用培养法检测，由于菌量少，需进行前培养和增菌培养，故费时较多，且需熟练的检测技术。因此，近年来国外对食物中毒致病菌简易快速的检测方法与器材的研究十分重视，许多公司纷纷研制出省时、容易判断结果的简易细菌检测方法与器材。目前，已达到实用化程度的快速、简易的细菌检测方法有：应用抗原体反应原理的免疫凝集法、免疫沉降法、免疫荧光法、 EIA法，免疫色谱法、以及磁珠法等，DNA探针法，PCR法。,分子生物学技术在检测食源性病原微生物中的应用,DNA探针技术 DNA探针技术是最新发展起来的一项特异、灵敏、快速的检测方法，但因有一定比例的假阳性反应，故所有阳性结果

27、必须用标准的培养方法加以确证。聚合酶链反应(PCR)技术 PCR技术原理为提高DNA探针的敏感性，可先将靶 DNA序列扩增，增加 DNA数量，使其达到足够的检测量，若反应以动力学为基础，则能定量分析。在PCR反应中引人Taq聚合酶使反应得以半自动化和简便反应程序。用扩增DNA进行的PCR反应具有无与伦比的优越性。,快速检出细菌的毒素,自临床标本中直接检出细菌的毒素，常比细菌培养更可靠。如难辨梭菌在正常肠道中也可出现，故对抗生素相关性肠炎的诊断，检出其毒素比细菌培养更有意义。已应用此类毒素的单抗以快速凝集或EIA法自粪便标本中直接检出毒素A或B进行诊断。产毒素埃希氏菌（ETEC）感染的诊断主要依

28、靠检查细菌的LT（热敏毒素）与ST（耐热毒素）可应用其单抗以多种免疫学手段检出。肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）的重要特征是产生Vero细胞毒素（VT）或称志贺样毒素（SLT）。由于EHEC的血清型繁多，生化反应也可不典型，故检查该菌的毒素极具诊断价值。,快速检出细菌的毒素,英国Unipaih公司已研制出VTEC的PRLA乳胶凝集试剂分别检查VT-1与VT-2，试验时以多粘菌素裂解菌体，释出VT，与乳胶试剂在U形板中温育24小时，肉眼判定有无凝集。日本生研公司的VIEC -RPLA也为快速凝集试剂。Bentin等注意到90%的VTEC在洗过的羊血肉汤平板上经37温育过夜可表现出溶血；而非溶血菌

29、落均无VT或SLT基因。这一发现为VTEC的检测提供一迅速的筛查方法。 金黄色葡萄球菌产生的多种肠毒素也用单抗的协同凝集试验迅速检出，是诊断该菌致成的事物中毒的可靠手段。应用反向被动乳胶凝集法（Oxoid公司试剂）快速检测葡萄球菌的TSST1，可及时诊断出由葡萄球菌致成的中毒性休克综合征。,快速的细菌对抗菌药物的敏感性试验,新的检测手段，如分子生物学手段检测细菌的耐药基因，自动化的药敏试验仪器，E test法等可提高准确性与效率 。 快速纸片法（Nitrocefin）检查内酰胺酶，对革兰阳性球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌有重要意义。 快速乳胶凝集试验（日本生研公司）可检出变异的青霉

30、素结合蛋白（PBP2a）经与mecA基因检测比较，其敏感性98.5%，特异性达100%。,细菌性食物中毒样品检验程序,1 样品采集 以无菌容器采集可疑样品及病人的排泄物。2分离培养 在病原菌不明确的情况下，多准备一些各类菌的选择性培养基，如ss平板，伊红美兰平板作沙门菌、志贺菌；血平板、P-K琼脂平板作金黄色葡萄球菌分离用；氯化钠蔗糖琼脂或TCBS琼脂作副溶血性弧菌及溶藻性弧菌用；甘露醇卵黄多粘菌素琼脂作蜡样芽孢杆菌分离用等等。接种：取适量可疑样品放置无菌平皿中，加入与样品等量的无菌生理盐水，将样品与生理盐水充分混匀，用取菌环分别接种于各种平板培养基上，置37 培养20h左右，观察各平皿菌落特

31、征，进一步鉴定。,细菌性食物中毒样品检验程序,3. 取优势菌株进行系统鉴定 对优势菌株进行涂片镜检，革兰染色，以形态特征、菌落特点做出意向性判断进行下步鉴定，接种克氏双糖含铁琼脂培养，然后做血清凝集，生化实验，毒性实验等，报结果 4.活菌数的测定某些细菌在食品中须达到一定量时才可引起中毒症状(如金黄色 葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌等)。方法是取样品的各个稀释液（包括1:10）0.1mL接种2只相应的平板，用灭菌玻璃棒在每只平板表面涂布均匀。将平板置30培养24小时， 数出可疑菌落数，然后挑取典型菌落5个或更多的可疑菌落，经过证实试验后，计算出菌落数。,细菌性食物中毒样品检验程序,5.毒

32、素测定 有些细菌性食物中毒并不是细菌本身所引起，而是由其所产生的毒素引起的，如金黄色葡萄球菌肠毒素、肉毒梭菌毒素，故须做其毒素的测定。 动物试验将可疑食物制备浸出液，或分离所得的上清液，皮下或腹腔注射动物(小白鼠 )体内，观察数日，看有无中毒 。,细菌性食物中毒样品检验程序,6.血清凝集试验 将中毒患者急性期和恢复期的血清，与自中毒检样中分离的致病菌所制成的菌体抗原(将分离菌接种培养基，37培养24小时，待其生长旺盛后，刮取菌苔至灭菌盐水中，混散均匀，用生理盐水稀释成6亿，毫升即成)做试管凝集试验，观察凝集价有无上升趋势，如恢复期的血清效价比发病初期有明显增高（增高4倍或以上）即有诊断价值。,经验,1.对所有样品进行致病菌分离和鉴定时应按照国家标准检验方法和已公认的微生物检验程序，应用直接分离及增菌双重培养，直接分离可检出样品中的优势菌(包括一些条件致病菌)增菌可将样品中污染的但又菌量较少的病原菌捡出，同时对服药患者肛试样品中被抗菌素抑制的细菌达到复苏和增加菌量帕作用 2.由于多种病原菌引起的食物中毒，有相类似的临床症状，因此对致病菌的检测范围应扩大，在分离培养时应多准备一些各类菌的选择性培养基，采取多思路、多方法同时检测各种致病菌的原则，从而获得满意的检验结果。,