美味猕猴桃根提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用.doc

1、美味猕猴桃根提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用作者：李丽， 钟振国， 梁洁， 甄汉深， 王乃平 【关键词】 美味猕猴桃；,肝损伤；,四氯化碳；,D-半乳糖胺摘要：目的研究美味猕猴桃根提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法分别采用 CCl4 和 D-半乳糖胺作为化学毒物制成急性肝损伤模型，采用赖氏法测定各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性，并测定肝匀浆 MDA 含量。结果 CCl4 肝损伤模型组和 D-半乳糖胺肝损伤模型组小鼠的血清 ALT 和 AST 均明显高于正常对照组(P0.01), MDA 含量高于正常对照组(P0.01),表明 CCl4和 D-

2、半乳糖胺均造模成功。CCl4 造模实验中美味猕猴桃根提取物高剂量组较模型组血清 ALT 和 AST 活性明显降低(P0.01),肝脏 MDA 含量明显降低（P 0.01） ，而在 D-乳糖胺造模实验中美味猕猴桃根提取物中剂量组较模型组血清 AST 明显降低（P0.01） ，肝脏 MDA 含量降低（P0.05） ，低剂量组较模型组 ALTAST 活性和 MDA 含量均明显降低(P0.01)。结论美味猕猴桃根提取物对小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。关键词：美味猕猴桃； 肝损伤； 四氯化碳； D-半乳糖胺Protective Effect of Roots of Acitinidia delicil

3、sa Against acute Hepatic Injury in MiceAbstract：ObjectiveTo study the protective effect of roots of Acitinidia delicilsa against acute hepatic injury.MethodsChemical liver injury models were made by D-galactosamine and Carbon tetrachloride and ALT,AST activities and MDA were detemined.ResultsSerum A

4、LT and AST levels in model mice were markedly higher than those in the control group (P0.01),MDA content was higher than that in the control group (P0.01),indicating successful model creation Comored with the model group, high and middle dosage of roots of Acitinidia delicilsa could signtficantly in

5、hibit the increase of activities of ACT and AST in serum and MDA content in hepatic tissue induced by CCl4. Howerer only low dosage of the drug could decrease the levels of ALT, AST in serum and MDA in hepatic tissue induced by D-galactosamine, the middle dosage group could only decrease the level o

6、f AST in serum and MDA in liver.ConclusionRoots of Acitinidia delicisa has a good protective effects on acute hepatic injury in mice , its rapeutic mechanism is related to the antioxidation.Key words：Acitinidia delicilsa; Hepatic injury; Carbon tetrachloride; D-galactosamine美味猕猴桃 Acitinidia C delici

7、lsa.F.liang et A.R.Ferguson 为猕猴桃科猕猴桃植物。本品酸微甘，凉，有小毒，具有清热，利尿，活血，消肿的功效,适用于治肝炎，水肿，跌打损伤，风湿关节痛，淋浊，带下，疮疖等诸症1 。本试验旨在就其对急性肝损伤的保护作用和作用机制进行探讨,以期客观评价猕猴桃对小鼠急性肝损伤的保护作用。1 器材1.1 动物清洁级小鼠,雌雄各半,体重（202 ）g,由广西中医学院实验动物中心提供，桂医动字 11004 号。1.2 药物美味猕猴桃根采集于广西桂林地区（全州） ，经中国科学院广西植物研究所植物分类室鉴定。美味猕猴桃根提取物是用 60%乙醇2经两次回流提取而成，最后得到稠膏。1.3

8、 试剂联苯双酯，广州星群（药业）股份有限公司，批号：H44023176：四氯化碳(CCl4),分析纯,中国医药（集团）上海化学试剂公司,批号:W20010202；D-半乳糖胺(D-GlaN),启东就丰工贸有限公司 ,批号:20060307；丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒, 丙二醛(MDA)测定试剂盒,均由南京建成生物工程研究所提供。1.4 仪器紫外可见光分光光度计：Agilent8453；高速微量离心机：LG16-W，北京医用离心机厂；高速低温离心机：德国 Biofuge strutos；日本岛津电子天平：LIBROR AEU-210；超声波细胞

9、破碎机：JY92-IID，宁波新芝科器研究所；数显恒温水浴锅：HH-8，国华电器有限公司；液体快速混合器：YKH-I，江西医疗器械厂。2 方法2.1 对 CCl4 所致急性肝损伤的影响取健康小鼠 60 只，雌雄各半，体重(202) g，随机分为 6 组,每组 10 只,分别为正常对照组、模型组、联苯双酯组（200 mg/kg） 、美味猕猴桃根提取物高剂量组(50 g 生药量/kg)、美味猕猴桃根提取物中剂量组(25 g 生药量/kg)和美味猕猴桃根提取物低剂量组(13 g 生药量/kg),分别灌胃给药,美味猕猴桃根提取物高、中、低剂量、联苯双酯均按 0.2 ml/10，g 给药，连续 7 d,

10、1 次/d,于末次给药 8 h 后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射 0.08%CCl4 花生油溶液 0.1 ml/10 g,禁食过夜不禁水,16 h 后全部小鼠摘眼球取血,离心,分离出血清,测定 ALT，AST。采血后,迅速解剖,取出肝脏,在同一肝小叶上取一小块肝组织用冰冷生理盐水漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,加生理盐水制成 10%肝匀浆,测其肝匀浆中 MDA 含量。2.2 对 D-GlaN 所致急性肝损伤的影响取健康小鼠 60 只，雌雄各半，体重（202） g，随机分为 6 组,每组 10 只,分别为正常对照组、模型组、联苯双酯组（400 mg/kg） 、美味猕猴桃根提取物高剂量组(1

11、00 g 生药量/kg)、美味猕猴桃根提取物中剂量组(50 g 生药量/kg)和美味猕猴桃根提取物低剂量组(25 g 生药量/kg),分别灌胃给药, 美味猕猴桃根提取物高、中、低剂量、联苯双酯均按 0.2 ml/10 g 给药，连续 7d,2 次/d,于末次给药 8 h 后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射 D-GlaN 溶液（450 mg/kg）0.1 ml/10 g,禁食过夜不禁水,16 h 后全部小鼠摘眼球取血,离心,分离出血清,测定 ALT，AST。采血后,迅速解剖,取出肝脏,在同一肝小叶上取一小块肝组织用冰冷生理盐水漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,加生理盐水制成 10%肝匀浆,测其

12、肝匀浆中 MDA 含量。2.3 数据处理所有数据均以s 表示,采用 t 检验观察其组间差异。3 结果3.1 美味猕猴桃根提取物对 CCl4 肝损伤生化指标的影响对血清ALT、AST 活力和肝匀浆中 MDA 含量的影响结果见表 1。表 1 美味猕猴桃根提取物对 CCl4 诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT、AST 活力和肝匀浆中 MDA 的影响（略）与对照组比较,P0.01;与模型组比较,*P0.05,*P0.01，*P0.05；n=10 由表 1 可知,CCl4 模型组小鼠血清 ALT，AST 活力和肝脏 MDA 含量明显高于正常对照组(P0.01),表明造模成功。美味猕猴桃根提取物高剂量组血清

13、ALT，AST 活力和肝脏 MDA 含量较模型组有显著降低(P0.01),中剂量组 AST 活性和 MDA 含量较模型组也有明显降低(P0.05),低剂量组降酶作用不明显,表明猕猴桃降酶作用呈一定的剂量依赖性，而且低剂量组肝组织中的 MDA 含量较模型组无统计学意义。结果提示美味猕猴桃根提取物对四氯化碳造成的肝损伤有一定的保护作用。3.2 美味猕猴桃根提取物对 D-GlaN 肝损伤生化指标的影响对血清 ALT、AST 活力和肝匀浆中 MDA 含量的影响结果见表 2。表 2 美味猕猴桃根提取物对 D-半乳糖胺诱导的急性肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活力和肝匀浆 MDA 含量的影响（略）与对照组

14、比, P0.01;与模型组比,*P0.05,*P0.01，*P0.05；n=10 由表 2 可知,D-GlaN 模型组小鼠血清 ALT，AST 活力和 MDA 含量明显高于正常对照组(P0.01),表明造模成功。美味猕猴桃根提取物中剂量组血清 AST 活力和 MDA 含量较模型组均有显著降低(P0.01，P0.05),而低剂量组均显著降低（P0.01） 。结果提示美味猕猴桃根提取物对 D-半乳糖胺造成的肝损伤有一定的保护作用。4 讨论本实验采用 CCl4 和 D-GlaN 造模,是因为 CCl4 是经典的化学性肝损伤动物模型的肝毒物,D-GlaN 肝损伤模型的病理改变与人类病毒性肝炎的病理改变

15、较为接近,且此两种模型均可造成实验动物血清 ALT、AST 升高和肝组织结构的病理改变,同时重复性好。资料表明 CCl4 所致肝损伤是典型的脂质过氧化损伤3 ，CCl4 进入肝细胞内,经细胞色素 P-450 代谢后,生成自由基(CCl3 和OOCCl3),后者可直接损伤质膜,并启动膜脂质过氧化，使膜稳定性降低，造成肝细胞变性坏死，其中线粒体膜受影响最大,这与线粒体生成自由基多,以及线粒体膜含酶丰富有关。CCl3 还可以与肝细胞微粒体脂质和蛋白质发生结合,损伤肝细胞膜的结构与功能,使肝细胞内可溶酶如 ALT，AST 等从细胞内游离出来,使血清 ALT，AST 升高,并最终导致肝细胞的坏死4 。因

16、此，血清中的 ALT，AST 水平的高低可以敏感地反映肝脏细胞膜的受损程度。本实验 CCl4 肝损伤组和 D-GlaN 肝损伤组与正常对照组比较,ALT，AST 活力明显升高,给予美味猕猴桃根提取物提取物后 ALT，AST 活力明显下降,提示美味猕猴桃根提取物具有保护肝细胞膜的作用,能使细胞膜的通透性降低，抑制细胞内酶的释放,从而改善肝损伤,促进肝功能的恢复。D-GlaN 损伤肝脏的机制是在代谢过程中与体内磷酸尿苷大量结合,形成稳定的尿苷衍生物,造成体内尿苷耗竭,从而使依赖磷酸尿苷进行生物合成的 RNA 和蛋白质糖原等物质合成受阻,导致肝损伤。另外,D-GlaN 还可通过产生自由基引起脂质过氧

17、化,造成肝细胞损伤5 ，此外,还可使肥大细胞脱颗粒释放组胺,造成结肠水肿,使肠源性内毒素吸收增加,引起内毒素中毒损伤肝脏。生物膜磷脂过氧化分解后,生成多种脂醇、脂醛和短链产物6,MDA 就是其中之一。MDA 为脂质过氧化的最终产物,可严重破坏细胞膜结构,导致细胞膜肿胀坏死,其血清及组织中的含量反映了组织过氧化损伤的程度和细胞受损程度7 。在本实验中经 CCl4 和 D-GlaN 造模的小鼠肝组织中的 MDA 含量明显升高,这些变化反映了脂质过氧化与肝损伤的关系，给予猕猴桃提取物后,CCl4、D-GlaN 肝损伤小鼠肝脏病理变化明显减轻,肝组织中的 MDA 含量明显下降,以上作用均呈剂量依赖，说

18、明美味猕猴桃根提取物对清除自由基,抑制脂质过氧化反应,维持细胞质膜的正常结构,避免细胞的损害有一定的作用。实验结果表明,美味猕猴桃提取物对化学性肝损伤有多种环节的保护作用,其机理可能是降低肝内脂质过氧化反应,清除自由基,保护肝细胞膜,维持膜的正常通透性等。参考文献：1 江苏新医学院.中药大辞典，下册M.上海：上海科学技术出版社，1997：2211.2 钟振国，张凤芬，甄汉深，等.美味猕猴桃根提取物抗肿瘤作用的实验研究J.中医学刊，2004，9（22）：70.3 朱起贵,曾岳祥,李天望,等.保肝康抗急慢性肝损伤的实验研究J.中西医结合肝病杂志,2000,10(6):31.4 王晓立.柳茶对 CCl4 肝损伤的保护作用及机理探讨J.中国中药杂志,1995,20(20):746.5 HuH.ProxidationmechanismandprotectiveeffectofzineonD-galactosmineinducedliverinjuryinratsJ.ChinJ.Pharma2col.andToxicol,1993,81(7):81.6 唐业贵.螃蜞菊药理作用及临床观察统计分析J.江西中医药,1990,21(3):52.7 张秀明,陈科力,李翰明,等.蛇葡萄根的抗肝降酶及抗自由基损伤作用J.中国药师,1999,2(5):225.