大孔吸附树脂用于葛根美容添加剂提取液的脱色研究.doc

1、大孔吸附树脂用于葛根美容添加剂提取液的脱色研究作者：黄显章，冯芸，尹玲，刘焱文【摘要】 目的开发一种高效实用的葛根美容添加剂提取液的脱色纯化技术。方法以脱色率及葛根素含量为指标，从 3 种大孔吸附树脂中筛选出葛根美容添加剂提取液的最佳脱色树脂，并以脱色率及葛根素含量为指标考察该树脂对葛根美容添加剂提取液的最佳脱色条件。 结果从 3 种大孔吸附树脂中筛选出 SA-2 型大孔树脂为葛根美容添加剂提取液的最佳脱色树脂，该脱色树脂对葛根美容添加剂提取液的的脱色率达 60%以上，葛根素得率达 90%左右。结论该脱色方法具有显著的脱色效果，有效成分得率较高，工艺稳定，操作简便，适合于规模化生产。 【关键词

2、】 大孔吸附树脂; 葛根美容添加剂; 脱色葛根美容添加剂由葛根、卷柏、丹参、当归、王不留行子等药材组成，为李时珍药业自拟美容丰胸方剂，经多年临床实践证明，内服外用均有显著的丰胸作用。但因其提取液色泽较重，易污染衣物，给外用带来了极大不便，故笔者采用大孔吸附树脂对其提取液进行了脱色研究。葛根为方中君药，其所含葛根素具有扩张血管、增加血流量、加快微血管血流速度等作用，为丰胸的主要有效成分之一1，2。因此本实验以葛根素的含量为指标,通过考察 SA-2 型、D101 型、AB-8 型等 3 种大孔吸附树脂对葛根美容添加剂提取液的脱色率及有效成分葛根素的得率，确定了葛根美容添加剂提取液脱色的最佳脱色树脂

3、及工艺参数，获得了较好的脱色效果。1 仪器与试药1.1 仪器 Agilent 1100 型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，UV-2401 型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，BP-211D 型十万分之一分析天平(德国 Sartorius 公司)，BN2744 型万分之一分析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)，RE 2000A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，SK2200H 超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。1.2 试药葛根(野葛)、卷柏、丹参、当归、王不留行药材饮片均由湖北李时珍药业有限公司提供，SA-2 型、D101 型、AB-8 型大孔吸附树脂购于天津欧瑞生物科技有限公司，

4、乙醇为食用酒精，葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110752-200209)纯度为 98%以上，甲醇为色谱纯，水为双蒸水,其他试剂为分析纯。2 方法与结果2.1 葛根美容添加剂提取液的制备 按处方比例称取葛根、卷柏 、当归、丹参 、王不留行子药材饮片，粉碎成粗粉，混匀，以 8 倍量 60%乙醇回流提取 2 次，2 h/次。过滤,合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至含生药量为 0.1 g/ml 的溶液，备用。2.2 葛根素含量测定方法2.2.1 色谱条件 3色谱柱为 Kromasil C18 柱(4.6 mm250 mm，5 m)，流动相为甲醇-水(2674)，流速为 1.2 ml/min

5、，检测波长为 250 nm，柱温 30。2.2.2 标准曲线的绘制精密称取葛根素标准品，置 10 ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。分别精密量取上述溶液，制成浓度分别为0.055 4，0.110 8，0.166 2，0.221 6，0.277 ，0.332 4 mg/ml 的葛根素标准品溶液，用微量进样器分别取 10 l 进样。以葛根素进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程 Y=4 877.5X-6.34，r =0.999 9，线性范围 55.4332.4 g/ml。2.2.3 样品测定精密吸取葛根美容添加剂提取液 1 ml，加 30%乙醇定容至 50 ml，摇匀，0.45 m 微孔滤

6、膜滤过，用微量进样器取 10 l，注入液相色谱仪，记录峰面积，以外标法计算葛根素的含量。2.3 脱色率的测定方法于 190800 nm 波长范围内对葛根美容添加剂提取液进行扫描，确定其最大吸收波长为 407 nm。以 407 nm 为检测波长,检测供试品溶液的吸光度 A 值,并计算脱色率。脱色率按以下公式计算：脱色率(%)=(A0At)/A0100%A0、At 分别代表吸附前的溶液的吸光度和吸附后溶液的吸光度。2.4 大孔树脂的筛选采用静态吸附法,通过测定大孔树脂对色素的脱色率及葛根素的含量来筛选合适的树脂。量取按常规方准确称量 3g 树脂于具塞瓶中，加人 20 ml 葛根美容添加剂提取液，置

7、于振荡器中振荡640 min 至达到吸附平衡，取其上层清液 1 ml，根据“2.2.3”测得各管葛根素含量，计算得率，根据“2.3”项下的方法测定溶液吸光度并计算脱色率。每一实验重复 3 次，平均误差5%。结果见表 1 所示。 表 1 各种树脂对色素的脱色率及葛根素得率由表 1 可见,3 种树脂的葛根素得率均较高，其中以 SA-2 型树脂最好。3 种树脂中 SA-2 型树脂的脱色率亦最高。因此，确定 SA-2 型树脂为葛根美容添加剂提取液的最佳脱色树脂。2.5 SA-2 型树脂脱色优化工艺的考察2.5.1 树脂用量的考察取葛根美容添加剂提取液 20 ml(相当于生药 2 g)，以 1 ml/m

8、in(6BV/h)的流速分别通过装有 6，8，10，12 gSA-2树脂的树脂柱，收集过柱液，检测脱色率和葛根素得率。每份平行试验3 次。结果见表 2。表 2 树脂用量的考察结果以上结果表明，树脂用量对葛根素得率影响不大，对脱色率有较大影响。树脂用量越大，脱色效果越好，但树脂量在 8 g 以上时增加不明显。因此，确定每 20 ml 药液用 8 g 树脂脱色为宜，即 1 g 生药用 4 g 树脂脱色。2.5.2 过柱流速的考察取葛根美容添加剂提取液 20 ml(相当于生药 2 g)，分别通过 3 根装有 8 g SA-2 型脱色树脂的柱子，流速分别为 0.5 ml/min(3 BV/h)，1.0

9、 ml/min(6 BV/h)，2.0 ml/min(12 BV/h)，收集过柱液，检测脱色率和葛根素得率。每份平行试验 3 次。结果见表 3。表 3 过柱流速的考察结果结果表明，过柱流速越慢，树脂对药液的脱离色率越高，药液颜色越浅，但葛根素得率亦越低。综合考虑，选定过柱流速 1 ml/min(6 BV/h)为最佳过柱流速。2.6 验证试验按处方比例称取葛根 100 g，卷柏 50 g，丹参 50 g，当归 30 g，王不留行 30 g，粉碎成粗粉，以 8 倍量 60%乙醇回流提取2 次，2 h/次。过滤,合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至含生药量为 0.1 g/ml 的溶液。称取 4 倍药材量已

10、经预处理的 SA-2 脱色树脂，湿法装柱, 将提取液以 6 BV/h 的流速过柱,收集过柱液。检测脱色率和葛根素得率。每份平行试验 3 次。结果见表 4。表 4 验证实验中葛根素的含量结果%实验结果表明，3 次验证试验所得样品颜色较浅，均为浅黄色，脱色率的 RSD 值为 1.1%;葛根素得率均较高，RSD 值为 1.5%。因此，可以确定该工艺稳定可行,适宜于工业化生产。3 讨论由于市场对美容保健类中药的特殊需求，脱色纯化已是中药尤其是美容保健类中药研制中的一个热点、难点问题。目前用于中药脱色的方法及工艺较多4，如水醇法、酸碱沉淀法、物理吸附法、化学吸附法、絮凝剂法、膜分离法等方法，其中利用大孔

11、吸附树脂脱色是近年来发展起来的一种新型脱色技术，具有操作简便、脱色效果好、成本较低、工艺稳定等优势。本实验进行了大孔树脂用于葛根丰胸添加剂提取液脱色的研究。通过静态吸附法从 3 种不同型号大孔树脂中优选出 SA-2 型大孔吸附树脂作为吸附材料，通过小试优化了最佳脱色条件，并进行了验证试验。结果表明，SA-2 型大孔吸附树脂对葛根丰胸添加剂提取液的脱色率和有效成分得率较高，脱色效果较好(脱色前为深褐色，脱色后为浅黄色)，取得了满意结果。【参考文献】1 巴音吉日嘎拉,佟春玲,白动义.葛根素对乳腺组织雌激素及孕酮受体基因表达的影响J.畜牧科学，2009，1：42.2 江庆华.葛根素的药理作用与临床应用近况J.中国热带医学,2006,6(2):326.3 国家药典委员会.中国药典，部S.北京:化学工业出版社，2005:234.4 毕丽华,谭 志.谈中药脱色方法J.中国医药导报，2007，36(4):235.